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詳細(xì)介紹
商品介紹：
Fluo-3，AM ester是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3，AM ester進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)源性酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為506 nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為526 nm。Fluo-3，AM ester的一個(gè)重要作用是其在高通量藥物篩選中的應(yīng)用。 別名：鈣熒光探針;鈣離子探針 CAS號(hào)：121714-22-5 分子式：C51H50Cl2N2O23 分子量：1129.85 純度：≥90%(HPLC) 性狀：紅色粉末 儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光，有效期12個(gè)月 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：鈣熒光探針(Fluo 3-AM)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100ug|1mg
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Sestrin3蛋白(SESN3)英文名稱：SESN3 ELISA Kit6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體包裝1g
Sestrin2蛋白(SESN2)英文名稱：SESN2 ELISA Kit載脂蛋白A1抗體包裝250mg
Sestrin1蛋白(SESN1)英文名稱：SESN1 ELISA Kit抑癌基因p14抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)英文名稱：S100B ELISA Kit抑癌基因p16抗體包裝25g
S100鈣結(jié)合蛋白A9(S100A9)英文名稱：S100A9 ELISA KitP27抗體/周期依賴激抑制劑包裝500g
S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)英文名稱：S100A8 ELISA Kit9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框171抗體包裝10MG
S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)英文名稱：S100A7 ELISA Kit20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框177抗體包裝1g
S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)英文名稱：S100A6 ELISA KitCD244抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)英文名稱：S100A4 ELISA Kit巨噬炎性蛋白1α抗體包裝25g
S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)英文名稱：S100A11 ELISA Kit巨噬炎性蛋白19抗體包裝5g
S100鈣結(jié)合蛋白A10(S100A10)英文名稱：S100A10 ELISA Kit色P450 3A4抗體包裝100g
S100鈣結(jié)合蛋白(S100)英文名稱：S100 ELISA Kit角蛋白6抗體包裝25g
R-型電壓依賴鈣離子通道α1E亞基(CACNα1E)英文名稱：CACNα1E ELISA Kit角蛋白7抗體包裝5g
R-脊椎蛋白1(RSPO1)英文名稱：RSPO1 ELISA Kit磷化角蛋白17抗體包裝100g
Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)英文名稱：RUNX2 ELISA Kit卷曲螺旋域蛋白質(zhì)85C抗體包裝25g
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品異鎖鏈試劑盒3-乙南美楝屬二酯;Cabralea
多粘類(lèi)芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格：>98%異檸檬脫氫試劑盒乙酰基二氫美味草 A;Acetyldi
發(fā)酵放線纖絲菌Actinotalea│fermentans 質(zhì)量規(guī)格：>96%異常凝血原試劑盒羽扇烯;Lupenone
鈣熒光探針(Fluo 3-AM)白地霉 氧化型谷胱甘肽生激表達(dá)基因2蛋白Elisa
米洛斯線芽孢桿 [1,3-雙[2,6-二異基苯基]-2-咪唑烷亞基]二氯[[2-(異氧基)-5-[(2,2,2-Artemin蛋白Elisa
停乳鏈球 3-(噻吩-2-基)-1H-吡唑-5-羧酸乙酯5羥色2B受體Elisa
Mesorhizobium silamurunense 2-溴-3,5-二氯苯胰高血糖樣肽Elisa
榮州農(nóng)研所絲桿 N-乙酰-5'-O-[二(4-甲氧基苯基)苯甲基]-2'-O-[(1,1-二甲基乙基)二甲基硅]-胞微囊藻Elisa
痢疾志賀氏51105 二羰基環(huán)戊二烯鈷III型原膠原N端前肽Elisa
大腸桿 4'-甲基-[1,1'-聯(lián)苯]-4-肝脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
空腸彎曲桿 3-苯基苯甲D-乳酸脫氫Elisa
干草鞘氨單胞 2-溴-2',5'-二甲氧基苯乙酮L-乳酸脫氫Elisa
短裙竹蓀 4-溴-3-甲氧基苯抗酪氨酸肌酸受體抗體Elisa
嗜熱脂肪地芽孢桿 2--5-氟甲酯流感病AElisa
Roseivivax lentus 偏鎢酸銨硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移Elisa
栗疫 4-氨基-1-甲酸芐酯抗連接抗體Elisa
假芝 反式-2,4-二氯苯乙烯酸CD19抗體Elisa
華盛頓腥擲孢 硅化鈷 (metals basis)維生D25Elisa
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