詳細(xì)介紹
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:人淋巴細(xì)胞分離液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:200ml
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
人淋巴細(xì)胞分離液采用優(yōu)質(zhì)原料科學(xué)配方配制而成。適用于從血液及組織勻漿中分離所需細(xì)胞。本品為無(wú)菌溶液。 儲(chǔ)存條件:室溫(18-25℃)避光保存。 開封后 2-8℃保存。 有效期:兩年。 使用方法: 由于各離心機(jī)的性能差異以及實(shí)驗(yàn)室的溫度不同,佳分離條件(離心轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間等)請(qǐng)根據(jù)實(shí)際摸索。 1.取新鮮抗凝血 1ml,與1ml Hank’s液混勻。 2.將以上液體小心加于 1ml的細(xì)胞分離液的液面上。 3.以 1500RPM離心15分鐘。 4.此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。第一層:血漿或組織勻漿液層。第二層:環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層:透明分離液層。第四層:紅細(xì)胞層 ● 此紅細(xì)胞層,表面有懸起的部分白細(xì)胞層。收集界面上的細(xì)胞,放入含 4-5毫升Hank’s 液的試管中,充分混勻后,以1500-2000RPM離心10分鐘。收集第二層細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)沉淀經(jīng)2次洗滌收集細(xì)胞。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
利福噴丁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fudosteine鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體包裝250mg
利福平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fudosteine半胱蛋白蛋白-6抗體(C端)包裝50mg
利福昔明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rocuronium Bromide周期A2抗體包裝1g
利可君(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Roxithromycin鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝25g
利拉萘酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Roxithromycin鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2b/2γ抗體包裝5g
利魯唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Selegiline HCl凋亡敏感性基因抗體包裝100g
利培(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3-Azabicyclo (3.3.0) Octane HCL天冬-胱特異性蛋白家族抗體包裝500g
利塞膦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sertraline HCL半胱蛋白-10抗體包裝1g
利塞膦鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sertraline HCL半胱蛋白蛋白-12抗體包裝5g
利托那韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SN38(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin )半胱蛋白蛋白-13抗體包裝100g
聯(lián)芐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SparfloxacinCD10抗體包裝25g
聯(lián)芐唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SparfloxacinCD105抗體包裝5g
聯(lián)雙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Afloqualone干生長(zhǎng)因子受體/表面分化抗原抗體包裝1g
鏈脲佐菌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Afloqualone離子通道蛋白2抗體包裝25g
兩性霉B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sufacetamide sodium角蛋白5抗體包裝5g
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR纖維蛋白原試劑盒脫氫紫堇堿;Dehydrocorydal
黑木耳Auricularia│auricula 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物試劑盒天冬酰;L-Asparagine
紅曲霉Monascus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:純度大于98%纖溶原試劑盒L-天冬;L-Aspartic ac
人淋巴細(xì)胞分離液皮傘 2-(4-溴基)酸過(guò)氧化物Elisa
波那雷恩沙門氏 L-2,4-二氯苯氨酸脂蛋白相關(guān)磷脂A2Elisa
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 辛酸甲酯纖溶原激活物抑制因子2Elisa
雅致小克銀漢霉 二二甲,異構(gòu)體混合物基質(zhì)金屬蛋白2Elisa
蟬花1-9 2,2'-氧二乙酸內(nèi)皮分泌蛋白 SCUBE2Elisa
枯草芽胞桿 苯黑腺病Elisa
氧化微桿 4-芐基哌鹽酸鹽副流感病IgM抗體Elisa
淤泥大洋芽孢桿 谷維呼吸道合胞病Elisa
釀酒酵母 N,N′-乙撐雙硬脂酰膠原蛋白三螺旋重復(fù)包含蛋白1Elisa
毛木耳(紫木耳、黃背木耳) 4-氨基-3,5-二氟苯晶狀體球蛋白αBElisa
金針菇 鹽酸多奈哌齊維生KElisa
穿孔假單胞 (3S,4R)-4-(4-氟苯基)-3-羥甲基-1-甲基HLAⅡ類組織相容性抗原DP鏈Elisa
嗜淀粉乳桿 亞甲基氨基乙HLAⅡ類組織相容性抗原DQ鏈Elisa
枯草芽孢桿 16,17-環(huán)氧脫氧核糖核酸13Elisa
鏈格孢 N,N-二甲基-3-氯日本腦炎病IgM抗體Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)