詳細介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
ELISA Kit檢測試劑盒優點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
LR/Ob-R ELISA Kit | GOY-E100166 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
二維生素K1 質量規格:美國進口 Dihydrovitamin K1 NCI-H1688(人典型小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
高良姜素(標準品) 質量規格:HPLC≥98%,標準品 Galangin 白色類諾卡氏菌 Nocardioides albus吸水鏈霉菌應城變種 Streptomyces hygroscopicus var. yingchengensis
二洛芬β-D-葡萄糖苷,非對映異構體混合物 質量規格:美國進口 Dihydro Ketoprofen β-D-Glucuronide, Mixture of Diastereomers A-427(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
亞木酚素 訂購|咨詢 規格: 20mg 全細胞色素C合成酶抗體 POFUT1 ELISA Kit 蛋白O-巖藻糖基轉移酶1(POFUT1)ELISA試劑盒
豬胰島素原 訂購|咨詢 規格: 2.2μg/支 p60TRP蛋白抗體 PGH2 ELISA Kit 前列腺素H2(PGH2)ELISA試劑盒
五味子素 訂購|咨詢 規格: 20mg 真核翻譯起始因子3亞基L蛋白抗體 IL2Rβ2 ELISA Kit 白介素12受體β2(IL2Rβ2)ELISA試劑盒
小白菊內酯 訂購|咨詢 規格: 20mg 激素受體相關蛋白16抗體 CT ELISA Kit 沙眼衣原體抗體(CT)ELISA試劑盒
旋復花內酯;Britannilacton 訂購|咨詢 規格: 10mg GADD45γ相互作用蛋白1抗體 PPA1 ELISA Kit 焦酶1(PPA1)ELISA試劑盒
2,4-氨基-6-氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T)) 質量規格:>98.0%(T) 2,4-Diamino-6-methoxy-1,3,5-triazine 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
葡萄糖;D(+)-Glucose 訂購|咨詢 規格: 100mg 碳酐酶11抗體 anti-C1q-antibody ELISA Kit 人抗補體1q抗體(anti-C1q-antibody)ELISA試劑盒
鹽羅格列(標準品) 質量規格:HPLC法含量測定 rosiglitazone hydrochloride 豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vignaBNL CL.2(小鼠胚胎肝細胞)
人參皂苷 F2 訂購|咨詢 規格: HPLC≥98%,20mg/vial FRMD5蛋白抗體 DYSF ELISA Kit 奇異不良素(DYSF)ELISA試劑盒
油鉀(>96%,BR) 質量規格:>96%,BR Potassium oleate 大鼠成纖維細胞*培養基Hs68(人男性正常龜細胞)
LR/Ob-R苗條素受體ELISA KitLB Broth, Lennox
沙氏葡萄糖肉湯 酵母菌、霉菌以及其它耐酸菌培養500g
SPS agar ANGELOTTI perfringens selective agar SPS瓊脂/ANGELOTTI 1.10235.0500MERCK默克
弧菌顯色培養基(VA) 1000mL/瓶
甘露醇瓊脂培養基 250(g)
Pfizer 腸球菌選擇性瓊脂 250(g)
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葉酸測定培養基 250用于嬰兒食品和乳粉中葉酸測定
Tryptone Soya Broth(Soybean Casein Digest Medium USP)胰蛋白胨大豆肉湯 Oxoid500G
中性大豆蛋白胨(Soya Peptone Neutralised) Oxoid400g
假單胞菌瓊脂P 用甘油在綠膿菌素產生基礎上檢測鑒別假單胞菌500g