Gram-Twort革蘭染色液公司*的產(chǎn)品：HPV18-E6/E6 protein /FITC 熒光標(biāo)記人類(lèi)狀瘤病18抗體IgG鄰酚酞 AR,溶
HPV16-E7/E7 protein/FITC 熒光標(biāo)記人類(lèi)狀瘤病16-E7抗體IgG鄰酚酞 AR,溶
H-ras/FITC 熒光標(biāo)記原癌因H-ras抗體IgG偶氮膦Ⅰ AR,顯色劑
Hrasls3/HREV107/FITC 熒光標(biāo)記HR

產(chǎn)品屬性：

中文名稱(chēng)：Gram-Twort革蘭染色液

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：4×100ml

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

度米芬英文名稱(chēng)： Picfeltarraenin X腺苷單磷活化蛋白激γ2抗體包裝25g

對(duì)磺酰；4-羧基磺酰英文名稱(chēng)： Stigmasterol glucoside血小板衍化生長(zhǎng)因子β抗體包裝5g

多索茶堿英文名稱(chēng)： Neamine 血小板衍化生長(zhǎng)因子γ抗體包裝1g

厄多司坦英文名稱(chēng)： RIFAMPIN QUINONE 血小板47蛋白抗體包裝5g

惡喹二英文名稱(chēng)： Rifamycin相關(guān)血漿蛋白A2抗體包裝100g

二尼柳英文名稱(chēng)： 7-ADCA血漿谷羧肽抗體包裝25g

二硫化四乙基秋蘭姆英文名稱(chēng)： Piperacillin磷化腫瘤抑制基因P53抗體包裝250ml

伐地考昔英文名稱(chēng)： Piperacillin撲克蒙蛋白抗體包裝100g

法莫替丁英文名稱(chēng)： Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate癌易感基因相關(guān)蛋白2包裝25g

反環(huán)鹽鹽；單氧化(MAO)抑制劑英文名稱(chēng)： Cloxacillin Sodium Salt Monohydrate細(xì)小清蛋白抗體包裝1g

非布索坦英文名稱(chēng)： Bleomycin A5 Hydrochloride 脂酰肌聚糖A抗體包裝100g

非那西丁英文名稱(chēng)： Erythromycin ethylsuccinate原鈣粘蛋白11抗體包裝25g

非諾洛芬鈣英文名稱(chēng)： GriseofulvinP選擇糖蛋白配體1抗體包裝500g

芬達(dá)唑；硫咪唑英文名稱(chēng)： Tivantinib, ARQ 197蛋白激N2抗體包裝100g

芬布芬英文名稱(chēng)： Ethyl vanillinG蛋白偶合受體激2抗體包裝25g

蟻巢傘屬Termitomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,日本進(jìn)口分裝混合系列蛋白激樣結(jié)構(gòu)域試劑盒白樺脂;Betulin

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>95%,葡萄籽提取物混合淋巴反應(yīng)封閉因子試劑盒濱蒿內(nèi)酯;Scoparone

綠針假單胞菌Pseudomonas│chlororaphis 質(zhì)量規(guī)格：UV>95%,分析標(biāo)準(zhǔn)品蛔蟲(chóng)抗體試劑盒酰芍藥苷;benzoylpaeoni
Gram-Twort革蘭染色液釀酒酵母 3-磺酰基5-羥基色氨酸Elisa

貝萊斯芽胞桿 2-(2-氟吡啶-3-基)二肽基肽ⅣElisa

木賊鐮孢 4-氟苯磺酰過(guò)氧化還原1Elisa

淺灰白鏈霉 3-甲基-2-吡啶甲酸孕Elisa

假單胞屬 3-氨基-5-硝基三氟甲苯明膠AElisa

釀酒酵母 2-乙酰基-4-丁酰基基質(zhì)金屬蛋白8Elisa

玉米大斑病 3-甲基三氟甲苯谷氨酸脫羧Elisa

薄花邊傘 二酐蛋白激BElisa

東方伊薩酵母 乙酯維生BElisa

棲熱 N,N'-二異基乙二維生EElisa

金龜子綠僵 2-煙酸甲酯鈣調(diào)蛋白Elisa

枯草芽孢桿 4-氨基-3-硝基三氟甲苯兒茶酚氧位轉(zhuǎn)移抗體Elisa

鴨肝炎病 2-氟-5-硝基三氟甲苯UbElisa

交鏈孢 9-溴-10-(1-萘基)蒽泛Elisa

*無(wú)色桿 三異酯蛋白Elisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)