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詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Hoechst33342染色試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：100T
發(fā)貨周期：1～3天
商品介紹：
Hoechst33342染色試劑盒可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測(cè)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342 能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33342 比正常細(xì)胞的多，熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33342 排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。Hoechst 33342的大激發(fā)波長為346nm，大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33342和雙鏈DNA 結(jié)合后，大激發(fā)波長為350nm，大發(fā)射波長為461nm。 本Hoechst 33342染色試劑盒可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 儲(chǔ)存條件：HO33342液-20℃避光保存。B液2-8℃保存。 有效期：一年。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
乙阿比特龍酯英文名稱： Dorzolamide HCl富含半胱C端蛋白1抗體包裝5g
異環(huán)磷酰英文名稱： Doxazosin MesylateE1A激活基因激蛋白2抗體包裝1g
扎西他濱,2',3'-二脫氧胞苷英文名稱： Doxazosin Mesylate壁合成蛋白43抗體包裝5g
子囊霉英文名稱： Doxorubicin HCl/Adriamycin19號(hào)染色體開放閱讀框29抗體包裝1g
紫杉英文名稱： Doxorubicin HCl/Adriamycin磷化p21蛋白抗體包裝250mg
左亞葉鈣；酰四氫葉鈣英文名稱： Doxycycline HCl磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體包裝25g
阿卡地新(AICAR)英文名稱： Doxycycline HCl磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體包裝5g
阿利克侖半富馬鹽英文名稱： Menadione磷化周期依賴性激2抗體包裝100g
阿齊沙坦英文名稱： Menadione磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體包裝25g
阿昔莫司，阿西莫司英文名稱： Econazole nitrate磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體包裝25g
英文名稱： Econazole nitrate磷化α-連環(huán)蛋白抗體包裝5g
安倍生坦英文名稱： Entecavir周期E2抗體包裝5g
力農(nóng)英文名稱： Entecavir磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激CAMK2B/D/G抗體包裝250mg
地平英文名稱： Epalrestat 腫瘤易感候選基因3抗體包裝100g
奧美沙坦；奧美沙坦英文名稱： Epirubicin HCl磷化腫瘤易感候選基因3抗體包裝25g
華癸中間根瘤菌Mesorhizobium│huakuii 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR胰島淀粉樣多肽試劑盒鹽堿;Ephedrine hydr
CBS7227=IFO10179資源名稱: 假白布勒酵母 質(zhì)量規(guī)格：>95%脂溶性的原激活肽試劑盒原人參三;Protopanaxatri
棲熱菌Thermus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR原Ⅱ試劑盒原人參二;Protopanaxdiol
Hoechst33342染色試劑盒中國克魯維酵母 6-氯水楊酸重組人脂肪因子Elisa
黃色短桿 N,N',N'',N''',N'''',N'''''-六-O-乙酰基殼六糖成纖維生長因子13Elisa
猴頭 制霉藥敏紙片補(bǔ)體C5轉(zhuǎn)化Elisa
金黃殼囊孢 氨芐青霉藥敏紙片特異性IgG抗體Elisa
貝雷絲孢酵母 異鋁KI67抗原Elisa
球孢白僵 丁香連氮β肌動(dòng)蛋白Elisa
總狀毛霉 大孔樹脂XDA-1β肌動(dòng)蛋白Elisa
沼澤紅假單胞 D-腺病抗體Elisa
大腸埃希氏 愈創(chuàng)木酚支原體Elisa
溶桿 鄰苯二甲酸核因子κB抑制物激Elisa
串珠鐮刀 羊毛脂總膽固Elisa
氧化微桿 雙氯酚 白介13Elisa
核青霉 高效氯氟菊酯凝血Elisa
類芽孢桿 環(huán)沙星FAT4Elisa
明尼蘇達(dá)被毛孢 鄰苯二甲酸二癸酯高分子量脂聯(lián)Elisa
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