詳細介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。*,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
ELISA Kit檢測試劑盒優點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
PDI ELISA Kit | GOY-E98797 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數。
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樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水??;
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
人蛋白酪氨酸磷酸酶受體K(PTPRK)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human PTPRK (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type K) ELISA Kit
人L選擇素(SELL)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SELL (L-Selectin) ELISA Kit
人MAX二聚化蛋白1(mxd1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human MXD1 (MAX Dimerization Protein 1) ELISA Kit
人N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human NAGase (N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit
人血紅蛋白μ (HBμ)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human HBμ (Hemoglobin, Mu) ELISA Kit
人神經調節蛋白2(NRG-2)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human NRG-2 (Neuregulin 2) ELISA Kit
人神經調節蛋白3(NRG-3)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human NRG-3 (Neuregulin 3) ELISA Kit
人NOD樣受體(NLR)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human NLR (NOD-Like Receptor9) ELISA Kit
人氨基端前腦鈉素(NT-proBNP)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human NT-ProBNP (N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit
人N端外顯肽(Ext-N)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human Ext-N (N-Terminal Extein) ELISA Kit
人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human N-MID-OT (N-MID Osteocalcin) ELISA Kit
人蛋白酪氨酸磷酸酶受體N(PTPRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human PTPRN (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit
人Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit
人N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶(GAS)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human GAS (N-Acetylgalactosamine 6-Sulfatase) ELISA Kit
PDI蛋白質二硫鍵異構酶ELISA Kit菖蒲 CAS 21698-44-2 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
阿馬堿 CAS 483-04-5 規格: HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢
白頭翁皂苷E-2 CAS 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
水蘇堿 CAS 4136-37-2 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
白頭翁皂苷A CAS 129724-84-1 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
谷氨酸單鈉鹽 CAS CAS:6106-04-3 規格: HPLC≥98%;50mg 訂購|咨詢
異水飛薊賓 CAS 72581-71-6 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
對羥基 CAS 123-08-0 規格: HPLC≥99%;100mg 訂購|咨詢
茄醇 CAS 13190-97-1 規格: HPLC≥97%;20mg 訂購|咨詢
1,8-桉葉素 CAS 規格: HPLC≥99%;0.5mL 訂購|咨詢
林澤蘭內酯B CAS 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
28-去甲基-β-香樹脂 CAS 規格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
氫東莨菪堿 CAS 114-49-8 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
蒼術素 CAS 55290-63-6 規格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢