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牛β羥丁酸(BHBA)酶聯免疫分析ELISA試劑盒實驗原理

本試劑盒應用間接法測定標本中牛β羥丁酸(BHBA)水平。用純化的牛β羥丁酸(BHBA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的β羥丁酸(BHBA)標準品和未知濃度的β羥丁酸(BHBA)待檢樣品，溫育后，加入生物素標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β羥丁酸(BHBA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛β羥丁酸(BHBA)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

8

標準品S1（18μmol/L）

0.5ml×1瓶

2

鏈霉親和素-HRP

6ml×1瓶

標準品S2（12μmol/L）

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

標準品S3（6μmol/L）

0.5ml×1瓶

4

生物素標記的抗-IgG抗體

6ml×1瓶

標準品S4（3μmol/L ）

0.5ml×1瓶

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

標準品S5（1.5μmol/L）

0.5ml×1瓶

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

9

說明書

1份

7

終止液

6ml×1瓶

10

封板膜

2張

牛β羥丁酸(BHBA)酶聯免疫分析ELISA試劑盒標本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中加入50微升樣本，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
加生物素標記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
洗滌：操作同4。
加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
洗滌：操作同4。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數（×5×n）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

線形范圍：

0 -22μmol/L

規格：

96人份/盒

牛β羥丁酸(BHBA)酶聯免疫分析ELISA試劑盒保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月