国产一卡2卡三卡4卡麻豆_了解最新日韩草逼视频_h片在线播放一区_国产激情影视在线_好了av四色综合无码久久_欧美黑白双插OOR720P_日本精品中文字幕在线_秋霞午夜手机影院_亚洲国产一区二区3da毛片_欧美杂交深喉video中文字幕

細(xì)胞生長的空間密度是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵。具體養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)該摸索細(xì)胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細(xì)胞瓶里的細(xì)胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細(xì)胞濃度低于1~5×10^5個/mL而導(dǎo)致“孤獨(dú)死”（因?yàn)榧?xì)胞的健康生長需要細(xì)胞間的連接）。因而細(xì)胞接種前，要先通過細(xì)胞計數(shù)來調(diào)整細(xì)胞濃度。
當(dāng)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞形態(tài)不好時，可在傳代時，先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清都可以）洗滌一次，用滴管吸走，再加入3ml培養(yǎng)基，沿著瓶底輕輕吹打一遍，然后吸走。這時在正式進(jìn)行消化、吹打。
其次，把吹打下的細(xì)胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，按時間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況（10min，20min，30min）。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次，然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。直至找到細(xì)胞的形態(tài)為止。
至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量，則是需要實(shí)驗(yàn)汪們自己去摸索的。對于生長快的細(xì)胞，易生長的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基，細(xì)胞形態(tài)會更好，但是要注意對換液時間的把握。
如何選擇培養(yǎng)瓶。一般，生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細(xì)胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此，對于同一種細(xì)胞，在其生長速度慢的時候（比如細(xì)胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會好一點(diǎn)；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點(diǎn)。
細(xì)胞凍存時，蓋子要擰緊，不然復(fù)蘇水浴時會滲水，造成細(xì)胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子、型號的管子會有差別），蓋子擰緊后用封口膜封住。且每支凍存管都要標(biāo)上細(xì)胞的名稱、凍存時間，并記錄在冊，以免后續(xù)復(fù)蘇細(xì)胞時，取錯細(xì)胞。
細(xì)胞凍存時要嚴(yán)格進(jìn)行梯度降溫（-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮）。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會讓嬌弱的細(xì)胞自爆身亡，謹(jǐn)記：緩降溫！但如果真心趕時間時，可以使用細(xì)胞凍存盒進(jìn)行細(xì)胞凍存，而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中。此外，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細(xì)胞全部浸在液面下。
細(xì)胞解凍時，由于凍存管管壁較厚、隔熱，而導(dǎo)致水浴時間太長（2min還沒融化）時，可以將水浴鍋的溫度調(diào)至40℃左右，可以縮短解凍時間。
提前預(yù)定超凈臺，減少復(fù)蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細(xì)胞房人滿為患，超凈臺使用緊張，復(fù)蘇1h后，還沒有加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶，凍存時保護(hù)細(xì)胞，但復(fù)蘇融解后，浸泡時間太久會對細(xì)胞有毒性）
復(fù)蘇細(xì)胞時一定要有耐心，因?yàn)橛行┘?xì)胞在復(fù)蘇一星期后才會真正有起色。因而，盡管細(xì)胞在復(fù)蘇三四天后沒有任何動靜，也不要輕易倒掉所有細(xì)胞，要耐心等待，兩周后再做決定。