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轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存程序
閱讀：247 發(fā)布時(shí)間：2018-7-5轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存程序：
1） 單層細(xì)胞的消化。將經(jīng)24~48小時(shí)培養(yǎng)已長成單層的傳代細(xì)胞培養(yǎng)物棄去生長液，加適量ATV，1~2分鐘后倒棄ATV，再加入少量ATV液，經(jīng)0.5～1分鐘倒去ATV，室溫或37oC溫箱作用2~3分鐘，視細(xì)胞解離情況，拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶。使單層細(xì)胞*解離。SP2/0瘤細(xì)胞，待生長好后用吸管吹打，再經(jīng)1 000轉(zhuǎn)/ 分離心lO分鐘。
2） 離心洗滌：向培養(yǎng)瓶內(nèi)加5~1 0m1預(yù)冷的MEM使細(xì)胞懸浮，再將其吸出置滅菌離心管中，以1 000rpm 離心8～10分鐘后棄去上清液。
3） 細(xì)胞懸液的制備：向離心管內(nèi)逐滴緩慢加入預(yù)冷的凍存保護(hù)液，使細(xì)胞濃度為150~400萬/ml，然后迅速分裝于安瓿瓶中，每瓶加量為lml。
4） 致冷凍結(jié)：將安瓿瓶放入帶有棉墊的紙盒或塑料盒內(nèi)，直立置不同條件下致冷凍結(jié)果保存：
a、4oC兩小時(shí)后移至一2OoC作用2小時(shí)，再移入一4OoC4小時(shí)后在一7OoC下24小時(shí)投入液氮。
b， 一20oC4小時(shí)后移致一4OoC。C經(jīng)4小時(shí)移人一7OoC冰箱24小時(shí)，投入液氮。
c， 一4OoC4小時(shí)后移入一70oC24小時(shí)后投入液氮。
d、一20oC4小時(shí)后移入一70oC經(jīng)24小時(shí)后投入液氮中。
e、一70oC24小時(shí)后投入液氮中。
5） 液氮中保存：將凍結(jié)后的安瓿裝入預(yù)冷的小布袋中，投入液氮。為防止安瓿漂浮，可預(yù)先在小布袋中加入幾塊小卵石。
3. 玻璃化法
玻璃化保存（Vitrification）是一種超速冷凍方法。它是以極快的速度冷凍細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)外的游離水迅速形成玻璃樣物質(zhì)，而不形成冰晶。這種保存方法既避免了由于慢速降溫時(shí)導(dǎo)致的鹽濃度升高，又防止了由于冰晶形成造成的物理損傷，可獲得較高存活率。
玻璃化首先由Luyet在1937年提出，他認(rèn)為生命是生物活體系統(tǒng)的原子或其他結(jié)構(gòu)元的一種特殊排列.并且輕微的排列位置擾動(dòng)就會(huì)破壞平衡從而導(dǎo)致死亡，而結(jié)冰時(shí)的驅(qū)動(dòng)力會(huì)破壞這種特殊的排列，這就是冰凍死亡的原因。玻璃
轉(zhuǎn)化細(xì)胞化比凍結(jié)固化方法引起的結(jié)構(gòu)變化要小，因而是一種較理想的低溫保存途徑。
Tanshinone IIA 丹參酮IIA 568-72-9 HPLC≥98% 20mg/支
丹參酮IIA-磺酸鈉
Tanshinone I 丹參酮I 568-73-0 HPLC≥98% 20mg/支
Dihydrotanshinone I 二氫丹參酮I 二氫丹參酮 87205-99-0 HPLC≥98% 20mg/支
Cryptotanshinone 隱丹參酮 35825-57-1 HPLC≥98% 20mg/支
Sodium Danshensu 丹參素鈉 67920-52-9 HPLC≥98% 20mg/支
Oridonin 冬凌草甲素 28957-04-2 HPLC≥98% 20mg/支
Coenzyme Q10 輔酶Q10 303-98-0 HPLC≥98% 20mg/支
Tetrandrine 粉防己堿 漢防己甲素 518-34-3 HPLC≥98% 20mg/支
Fangchinoline 防己諾林堿 漢防已乙素 33889-68-8 HPLC≥98% 20mg/支
轉(zhuǎn)化細(xì)胞