化工儀器網
技術文章
轉化細胞培養物污染的源頭
閱讀：330 發布時間：2018-1-25轉化細胞培養物污染——培養物可被細菌、酵母、真菌、病毒、支原體、甚至其他細胞種類所污染。各種污染都會導致產生錯誤的結果。支原體污染——支原體污染在所有培養細胞中的比例為5-35%，它可改變細胞生長特性，酶的作用途徑，細胞膜的組成，染色體結構，以及轉染效率。特別是，支原體對采用脂質、DEAE-右旋糖酐、磷酸鈣或腺病毒介導的轉染技術有所干擾，其結果致使非典型轉染或轉染效率偏低。這些影響會導致實驗結果的不可靠以及時間和珍貴細胞系的損失。和細菌及真菌不同，支原體污染無法通過視覺檢查發現。它們非常小甚至能夠通過大多數的無菌濾膜;它們還對常用抗生素有抗藥性。所以必需進行支原體污染的常規篩查。
要素二：載體DNA 一般原則：對純化所得的載體進行質量鑒定。確定維持其正常功能的基因序列是否適合于您的細胞體系。在測定細胞體系的參數時，一定要選用一種已知具有功能的載體做對照。 載體的完整性——載體是否具有功能取決于它結構的完整性。轉染效率受到質粒制備物的超螺旋結構和舒展結構之間比例、雙螺旋斷裂、核酸酶的降解，以及來自于儲存和處理過程中的物理壓力的影響。載體制備物——各種載體是按照不同的方案在細菌體系中制備并純化。制備產物中殘余的污染物(如CsCl，內毒素)可能會影響轉染效率。載體構造(啟動子/增強子/ORI)—轉染體系通常用帶有強病毒調節元件(如，RSV，CMV，和SV40)的對照載體進行優化和比較。然而，病毒啟動子/增強子體系的相對有效性在不同細胞系間的差異可大到兩個數量級。例如，在某些細胞系中，由于自發的質粒擴增，SV40體系可表達large T抗原(如，COS);而在其他許多細胞系中，則是CMV啟動子更為有效。 除此之外，各種CMV載體的表達率也會有超過一個數量級的差異，這部分是由于載體中其他調節元件所引起的。
要素三：組織培養試劑 一般原則：優化您的細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養基和添加劑，并盡可能減少所用試劑的變更。基礎培養基——培養基的成分包括營養物質(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，和緩沖物質。轉化細胞有些成分非常不穩定，因此如果在使用時不是新鮮，加入就可能會產生問題。配置時要使培養基務必避光保存;因為已知有一些組分和緩沖物質，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產生細胞毒性物質。 胎牛血清——血清是一種含有白蛋白、球蛋白、生長促進因子和生長抑制因子的極為復雜的混和物。采集血清所用動物的年齡、營養水平和健康狀況可影響到血清中這些成分的數量和質量，從而引起顯著生物學變化。
半胱胺酸蛋白酶蛋白-7IgG 小鼠膽堿磷酸甘油酯(PC/CPG)
半胱天冬酶-3酶原IgG 小鼠膽堿磷酸甘油酯(PC/CPG)
半乳糖激酶1IgG 小鼠膽固醇酯轉移蛋白(CETP)
半乳糖凝集素-3IgG 小鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)
半乳糖凝集素IgG 小鼠大內皮素(Big ET)
伴肌動蛋白IgG 小鼠催乳素(PRL)
包含氧化還原酶的WW域IgG 小鼠催產素(OT)
胞漿-5´-核苷酸酶-ⅡIgG 小鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)
胞漿環氧化物水解酶IgG 小鼠促腎上腺皮質激素(ACTH)
轉化細胞