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影響轉(zhuǎn)化細(xì)胞存活與否及狀態(tài)的因素
閱讀：135 發(fā)布時(shí)間：2018-1-18剛開始學(xué)習(xí)轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)的朋友們，在傳代時(shí)總會遇到一些問題，例如：加胰酶1ml，與細(xì)胞充分接觸后棄去胰酶，放入37℃孵育2min，顯微鏡下觀察，總是周邊細(xì)胞先開始變圓、脫落，中間細(xì)胞總是消化較慢，后加培養(yǎng)液終止消化，吹打很多次鏡下看還是有不少細(xì)胞團(tuán)，是消化不夠嗎？
可以這樣說，對于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好zui至關(guān)重要的考驗(yàn)。
很多同學(xué)都遇到過這個(gè)問題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個(gè)問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長越差。
在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個(gè)問題就是，細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會有脾氣啊。。。呵呵。我后來對消化的方法進(jìn)行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細(xì)胞為例）
具體操作：
1）.首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，（這是前奏，即為*步，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。
2）.然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了。）
3）.吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。
4）.然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú)立開來的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（實(shí)際情況你自己把握）。這是第四步。
其實(shí)還可以有第五步，對于特別難消化的轉(zhuǎn)化細(xì)胞和對胰酶特別敏感的細(xì)胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細(xì)胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能zui大限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到zui低，保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠*。
黃豆苷元 含量測定 100mg 100347-200702
7－甲氧基－4’－羥基異黃酮 有關(guān)物質(zhì) 20mg 100348-200301
二甲磺酸阿米三嗪 含量測定 100mg 100349-200501
蘿巴新 含量測定 100mg 100350-200501
卡莫氟 含量測定 50mg 100352-200301
奧沙普秦 含量測定 50mg 100353-200301
煙酸占替諾 含量測定 100mg 100356-201002
鹽酸帕羅西汀 HPLC法含量測定 100mg 100357-200301
卡巴膽堿 UV法含量測定 30mg 100361-200301
轉(zhuǎn)化細(xì)胞