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轉化細胞培養器械的清洗操作步驟
閱讀：523 發布時間：2017-5-231.轉化細胞清洗
(1)玻璃器皿的清洗
步驟：按浸泡→刷洗→浸酸→沖洗等四步程序進行。
①浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質，故先用自來水浸泡過夜、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡過夜或煮沸30min，水洗。要領：培養用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。
②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質，沖洗晾干。要領：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛刷和洗滌劑。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。會嚴重破壞玻璃器皿的光潔度。特別注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗滌劑沖干凈。
③浸酸：將器皿浸泡于清潔液24h，如急用也不得少于4h。清潔液由重鉻酸鉀、濃硫酸及蒸餾水配制而成，具有很強的氧化作用，去污能力很強。經清潔液浸泡后，玻璃器皿殘留的末刷洗掉的微量雜質可被*清除。
④沖洗：先用自來水充分沖洗，吸管等沖流10min，瓶皿需每瓶灌滿、倒掉，反復10次以上。然后再經蒸餾水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干備用。對已用過的器皿，凡污染者必先經煮沸30min或放3%鹽酸中浸泡過夜，未污染者可不需滅菌處理，但仍要刷洗、清潔液浸酸過夜，沖洗等。
矽酸鈉洗液
貯存液(×100)
砂酸納80克加偏磷酸鈉9克加熱溶在1000ml水中。使用時用水稀釋100倍，將器皿放入煮沸20min，冷卻后沖洗，再用2%HCl浸泡2h后，自來水沖洗。矽酸鈉洗液較清潔液安全，但價格較貴。
(2)轉化細胞塑料器皿清洗
自來水充分浸泡→沖洗→2%Na0H浸泡過夜→自來水沖洗→2%~5%鹽酸浸泡30min→自來水沖洗→蒸餾水漂洗3次 →晾干→紫外線照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外線照射30min)。凡能耐熱的塑料器皿，經101.3kPa(121.3℃)高壓滅菌。
(3)膠塞等橡膠類處理
新購置者先經自來水沖洗→2%NaOH煮沸15min→ 自來水沖洗→2%~5%HCl煮沸15min→ 自來水沖洗5次以上→蒸餾水沖洗5次以上→ 蒸餾水煮沸10min，倒掉沸水讓余熱烘干瓶塞等。或蒸餾水沖洗晾干，整齊擺放于小型金屬盒內經101.3kPa高壓滅菌。
(4)金屬器械的清洗
新購進的金屬器械常涂有防銹油，先用沾有汽油的紗布擦去油脂，再用水洗凈，zui后用酒精棉球擦拭，晾干。用過的金屬器械應先以清水煮沸消毒，再擦拭干凈。使用前以蒸餾水煮沸10min，或包裝好以101.3kPa高壓15min。
(5)除菌濾器的處理
用過的濾器將濾膜去除，用三蒸水充分洗凈殘余液體，置干燥箱中烘干備用。
2.包裝
包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染，所以經清洗烤干或晾干的器材，應嚴格包裝后再行消毒滅菌處理。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。包裝分為局部包裝和全包裝兩類，前者用于較大瓶皿，一般用硫酸紙和牛皮紙將瓶口包扎好;后者適于較小培養瓶皿、吸管、注射器、金屬器械和膠塞等，以下為常用瓶皿、吸管、無菌衣帽等的包裝方法，其它物品可參照處理。
①瓶類：硫酸紙罩以瓶口,外罩二層牛皮紙用繩扎緊。
②小瓶皿、膠塞、刀剪等器械可裝人飯盒，飯盒再以牛皮紙包好，繩扎好。
③吸管、滴管口用脫脂棉塞上(不要太緊或太松)裝人消毒筒內，濾器、濾瓶、橡皮管等都要用牛皮紙包好瓶口等，外罩一層牛皮紙包好，再用包布包好。
④無菌衣、帽、口罩，均以牛皮紙或包布包好，繩扎好。
3.消毒滅菌
嚴格的消毒滅菌對保證細胞培養的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學消毒劑等。
①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。
②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。
③濾過除菌：適于含有不耐熱成分的培養基和試劑的除菌，用孔徑為0.22μm微孔濾膜可除去細菌和霉菌等，用此濾膜過濾兩次，可使支原體達到某種程度的去除，但不能除去病毒。
④紫外線：紫外線的波長為200~300nm，zui強是在254 nm，6~15平方米zui少一只紫外燈，高度要在2.5m以下，濕度45%~60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌zui差，實驗前應不低于30分鐘的照射時間。
⑤熏蒸消毒：當遇有細胞培養出現多次污染，或實驗室兩個月一次的常規消毒，均可用高錳酸鉀5~7.5g，加甲醛(40%)10~15ml，混合放入一開放容器內，立即可見白色甲醛煙霧，消毒房間需封閉24小時，致少4小時以上。
⑥煮沸消毒：緊密情況時使用，金屬器械和膠蹇在水中煮20~30分鐘，趁熱傾去水分即可使用。
⑦轉化細胞化學消毒：化學藥品消毒滅菌法是應用能殺死微生物的化學制進行消毒滅菌的方法。實驗室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學藥品進行消毒殺菌。常用的有：2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、3~5%甲醛溶液、75%酒精。