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干粉細胞培養基的配制方式及注意事項
閱讀:5242 發布時間:2017-5-18在干細胞培養基配制過程中,不同的培養基其溶解性可能有一定的差別,培養基配制過程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時間和用量、pH和滲透壓的測定及酸堿度是否需要調節等,都可能影響zui終細胞培養基性能的發揮。
(1)配制常規過濾除菌粉末細胞培養基
1) 配制用水:通常選擇制備的超純水器過濾出的去熱原(細菌內毒素<0.25EU/m)培養基用水(TOC< 10μg/L或者是10mg/L,電阻率:18.2MΩ(25℃))。現用現制備,隔夜儲存用水(非無菌)的細菌內毒素及電導率等升高,影響細胞的增殖和產品的質量;
2) 培養基粉劑的稱量:小量采用天平稱量,要求準確;大量采用市售大包裝,配制時可以根據說明;
3) 干細胞粉劑溶解:溶解充分,觀察有無顆粒,顏色改變情況等;
4) 過濾前約半個小時(根據配制量可調)按使用說明添加NaHCO3,充分溶解;
5) 測定pH,根據需要用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液來調節pH。過濾后的pH將會有所增長;
6) 定容,檢測滲透壓;
7) 盡快過濾、分裝,封好瓶口,避免漏氣,2~8℃保存;
8) 采用一次性濾器時濾后檢查濾膜,有無漏、裂、是否很臟或是有未溶解物;采用不銹鋼濾器(內置可反復用的除菌濾芯)需進行濾器的完成性檢測;
9) 過濾前、中、后三段采樣進行無菌檢測,同時,留取樣品置于37℃培養,至該批培養基用完;
10) 完整記錄整個過程每一個步驟,便于追溯。
(2)配制可高壓滅菌粉末細胞培養基
1) 其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過濾型培養基配制方法。溶解后高壓,通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
2) 待細胞培養液冷卻至室溫,按一定比例加入無菌的谷氨酰胺溶液、無菌7.5%(w/v)碳酸氫鈉溶液,加注射用水(水溫20℃~30℃)至規定體積,混勻。
3) 如果必要,用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液調pH至所需值。
4) 干細胞溶液應在2℃-8℃下避光保存。