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外周血淋巴細胞染色體標本制備與分析
閱讀：761 發布時間：2017-4-181. 轉化細胞采血及接種培養
1.1 在酒精燈火焰上，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml，使肝素濕潤至管壁。
1.2 常規消毒后，采集外周靜脈血5ml，轉動注射器使血液與肝素混勻。
1.3 在超凈工作臺中，預先將RPMI 1640液體培養基（5ml，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培養瓶中，再滴加25滴全血（6號針頭），水平搖動混勻。
1.4 置37℃恒溫培養箱中培養72小時。培養過程中每天水平搖動培養物1～2次，使血液均勻懸浮，再繼續培養。
1.5 終止培養前2～4小時，加入秋水仙素，使終濃度達到0.2μg/ml。輕輕搖動培養瓶，使秋水仙素混勻。繼續培養至72小時。
2．制片
2.1 收集轉化細胞時，去掉瓶塞，用乳頭吸管吸取培養液，充分混勻培養物，再將全部培養物吸入刻度離心管中。
2.2 1000 rpm離心8分鐘（注意先配平）。
2.3 棄上清液，加入37℃預溫的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml，用吸管輕輕吹打細胞團混勻后，置37℃恒溫水浴箱低滲處理25分鐘。
2.4 加入 1ml新配制的固定劑（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管小心吹打、混勻，1000rpm離心8分鐘。
2.5 棄上清液，加入8ml固定劑，吹打細胞團制成細胞懸液后，室溫下固定20分鐘。
2.6 1000 rpm離心 8分鐘。
2.7 棄上清液，重復固定一次。
2.8 棄上清液，根據細胞數量的多少適當加入數滴新配制的固定劑，吹打細胞制成懸液。
2.9 吸取少量細胞懸液，滴2～3滴于冰水浸泡過的載玻片上，吹散，氣干。
2.10 將標本置Giemsa染液中，染色8分鐘，水洗去浮色，氣干。
2.11 轉化細胞顯微鏡下觀察染色體標本分裂相的多少及分散情況。