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細(xì)胞內(nèi)堿性蛋白和酸性蛋白的顯示原理和方法
閱讀:18682 發(fā)布時(shí)間:2017-3-14原理
轉(zhuǎn)化細(xì)胞由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團(tuán)的數(shù)目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理?xiàng)l件下,整個(gè)蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷多,則為酸性蛋白質(zhì);帶正電荷多,則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)此,可將標(biāo)本經(jīng)三氯醋酸處理提出核酸后,用不同pH值的固綠染液分別染色,細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來(lái)。
1.以破壞脊髓法處死蟾蜍,將其腹面向上放人蠟盤(pán)中,剪開(kāi)胸腔,打開(kāi)心包。小心將心臟剪一小口,取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端,推片,按此法制備二張血涂片,室溫晾干。
2. 將涂片作好標(biāo)記放在70%乙醇中固定5分鐘,室溫晾干。
3.放入5%三氯醋酸中60℃30分鐘,抽提出核酸。
4.清水沖洗多次(3分鐘以上),以沖去痕跡的三氯醋酸。
5.濾紙吸干玻片上水分。
6. 一張片放入0.1%堿性固綠(pH8.0~8.5)中染色10~15分鐘,另一張片放入0.1%酸性固綠(pH2.0~2.5)染色5~10分鐘。
7.清水沖洗,蓋上蓋片鏡檢。
轉(zhuǎn)化細(xì)胞結(jié)果經(jīng)堿性固綠染色片中,胞質(zhì)、核仁不著色,細(xì)胞核大部分被染成綠色,是為堿性蛋白質(zhì)存在處。經(jīng)酸性固綠染色片中,因胞質(zhì)和核仁中有酸性蛋白,被染成綠色。