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碧云天生產的Recombinant Proteinase K (重組蛋白酶K),是一種不含動物源性物質的(animal origin-free, AOF)的蛋白酶K,通過畢赤酵母(Pichia pastoris)發酵并純化獲得。
Proteinase K,也稱protease K或endopeptidase K,中文名為蛋白酶K或肽鏈內切酶,CAS號為39450-01-6,屬于一種廣譜的SI氨酸蛋白酶,可被某些SI氨酸蛋白酶的抑制劑如PMSF、AEBSF等所抑制。蛋白酶K無明顯的切割特異性,能在脂肪族、芳香族或疏水性氨基酸的羧基側裂解肽鍵,可被蛋白酶K水解的最小的肽是四肽。蛋白酶K對天然蛋白質的酶切降解非常有效,因此常用于在核酸分離過程中快速滅活內源RNA酶、DNA酶等核酸酶,并消化核酸結合蛋白等。本重組蛋白酶K的基因序列來源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)的蛋白酶K基因。
本重組蛋白酶K應用廣泛。用于各種常見的分子生物學、細胞生物學等相關實驗時消化各種蛋白,例如基因組DNA抽提、酶的消化去除、制備原位雜交組織切片、提高PCR產物的克隆效率等。
本蛋白酶K不含DNase,不含RNase,無核酸殘留。
本重組蛋白酶K穩定性好。本重組蛋白酶K酶粉末在-20℃保存一年,酶活下降不超過2%;在25℃保存4個月,酶活下降均不超過4%。
本重組蛋白酶K活性高、純度高。本重組蛋白酶K酶活力≥30U/mg,純度≥95% (電泳),分子量約為28.9kDa。在pH7.5、37℃,以血紅蛋白為底物,1分鐘內可以產生相當于1微摩爾LAO氨酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定義為一個單位蛋白酶K酶活力。
本重組蛋白酶K在很寬的pH范圍內有效。有效的pH范圍為pH4.0-12.5,最佳pH范圍為pH7.5-8.0。
本重組蛋白酶K的最佳反應溫度為65℃,但在65℃或更高溫度時,蛋白酶K自身也會非常迅速地降解。很多時候反應溫度選擇50-55℃。
在0.2-1% SDS或約10mM尿素存在的情況下,蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml,根據所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
常用濃度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、鹽酸胍對蛋白酶K的活力影響不大。
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