詳細介紹
轉基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒方法使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
轉基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應流程:
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自備物品:
轉基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
5-羥-1-甲-3-三氟甲-1H-吡唑分子式:166.1分子量: C5H5F3N2O英文名稱:5- hydroxy -1- methyl -3- three -1H-CAS號:122431-37-2
1-(4-甲氧)乙炔-4-正戊分子式:278.39分子量: C20H22O英文名稱:1- (4-, -4-) - based acetylene - based acetylene groupCAS號:39969-28-3
2,6-二溴-1,4-二胺分子式:265.94分子量: C6H6Br2N2英文名稱:-1,4- two 2,6- dibromo benzene amineCAS號:29213-03-4
硫劑HVA-2(PDM)英文名稱:HVA-2 (PDM)CAS號:3006-93-7分子式:268.23分子量: C14H8N2O4
玫瑰紅鈉英文名稱:Rose redCAS號:523-21-7分子式:214.04分子量: C6Na2O6
鉬粉分子式:95.94分子量: Mo英文名稱:Molybdenum powderCAS號: 7439-98-7
甲酸鉀分子式:160.22分子量: C7H5kO2英文名稱:Potassium benzoateCAS號:582-25-2
二氫楊梅素英文名稱:Two HCAS號:27200-12-0分子式:320.25分子量:C15H12O8
異丁酰分子式:102.14分子量: C4H10N2O英文名稱:Iso butyl hydrazineCAS號:3619-17-8
聚偏氯乙膠乳英文名稱:Polyvinyl chloride latexCAS號:分子式: C6H8N3O2R分子量:
4-乙三氟硼酸鉀分子式:210.046分子量: C8H7BF3.K英文名稱:4- vinyl phenyl kbf4 threeCAS號:705254-32-6
轉基因植物EPSPS基因核酸檢測試劑盒方法SH3TC2 脫髓鞘相關蛋白SH3TC2N抗體 0.2ml
RING5 環(huán)指蛋白5抗體(E3泛素蛋白連接酶RNF5) 0.2ml
C20orf196 20號染色體開放閱讀框196抗體 0.2ml
ADAR1 (N-terminus) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體(N端) 0.2ml
CRIM1 富含半胱氨酸運動神經元蛋白1抗體 0.1ml
PAR-2 蛋白酶激活受體-2抗體 0.1ml
Phospho-Lyn (Tyr497) 磷酸化膜相關蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體 0.1ml
IL-16 白介素16抗體 0.1ml
SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗體 0.2ml
C12ORF63 12號染色體開放閱讀框63抗體 0.2ml
SHC3 SH2結構域蛋白C3抗體 0.2ml
MID1/Midline-1/RNF59 環(huán)指蛋白59抗體 0.2ml
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。