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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠精原干細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1203 |
商品介紹：
名稱 大鼠精原干細胞 2.組織來源：睪丸組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的一群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的一些*優勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節機制的深入研究，發生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養。在哺乳動睪丸內，發生時一個受高度調控和持續的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數量，另一方面又不斷執行分化成各級生精細胞直至最后生成。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物發生的最原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養體系的建立，在生物學、醫學、畜牧業及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠精原干細胞采用先機械吹打、后胰蛋白酶消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠精原干細胞經CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R171 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態球形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
uPAR 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD40 / TNFRSF5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD40 / TNFRSF5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
IL5Ra 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
IL5Ra 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
interleukin 8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
interleukin 8 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
BACE1 / ASP2 轉錄變體a 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
BACE1 / ASP2 轉錄變體a 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 NCSTN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
大鼠精原干細胞D-乙酯鹽酸鹽 BR(3-氯基)氧基硅烷 98%BetaGAL(Human Alpha-galactosidase) ELISA Kit 人β半乳糖苷
L-天門冬-β-芐酯 98%3-氯基二甲氧基硅烷 97%IDUA(Human Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit 人αL艾杜糖苷酸
N-乙酰-D-谷 BRγ-縮水甘油氧基氧基硅烷 97%Alpha2-AP(Human Alpha2-Antiplasmin) ELISA Kit 人α2抗纖溶
N-乙酰-L-蛋 98.5%三乙氧基硅烷 97%NAG(Human N-acetyl- Beta-D-glucosaminidase) ELISA Kit 人N-乙酰-β-D-葡萄糖苷
N-乙酰-D- BR甲基三乙氧基硅烷 98%PAL(Human L-Phenylalanine ammonla-lyase) ELISA Kit 人L苯解氨
BOC-O-芐基-L- 98%甲基氧基硅烷 98%5-NT(Human 5-Nucleotidase) ELISA Kit 人5核苷酸
叔丁氧羰基-L-賴 98%氧硅烷 95%1,3- BetaD-Glu(Human 1,3- BetaD glucosidase) ELISA Kit 人1,3-βD葡葡糖苷
BOC-甘 99%黃原膠 USP級CK(Human Creatine Kinase) ELISA Kit 人肌酸激
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