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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠氣管軟骨細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1399 |
商品介紹：
名稱 大鼠氣管軟骨細(xì)胞 組織來源氣管組織 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 方法簡介實(shí)驗室分離的大鼠氣管軟骨細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 推薦傳代次數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 推薦換液頻率每3-4天換液一次 |
實(shí)驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
MAG / GMA / Siglec-4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VSTM1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VSTM1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 APOA1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CCDC134 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GBP1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VCL / Vinculin 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL-1R8 / IL1RAPL1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 NGFR / P75 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠氣管軟骨細(xì)胞鋅指蛋白300(抗原)Anti-GMFB Antibody大鼠組織蛋白B（CTSB）elisa定量檢測試劑盒
鋅指脂蛋白-1a(抗原)Anti-GM-CSF(CSF2) Antibody大鼠角蛋白18（CK-18/KRT18）elisa定量檢測試劑盒
鋅指脂蛋白-1b(抗原）Anti-GMFG Antibody大鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域激2（Tie-2）elisa定量檢測試劑盒
人鋅指脂蛋白-1c(抗原)Anti-GNA14 Antibody大鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）elisa定量檢測試劑盒
干擾素-γ多肽抗原（大、小鼠）Anti-GNAI3 Antibody大鼠畸胎瘤源性生長因子1（TDGF1）elisa定量檢測試劑盒
干擾素-β抗原Anti-GNA14 Antibody大鼠生長分化因子6（GDF6）elisa定量檢測試劑盒
干擾素-β抗原Anti-GNAL Antibody大鼠NAD依賴性蛋白脫乙酰sirtuin-1（SIRT1）ELISA kit
前列腺干抗原Anti-GNAT1 Antibody大鼠垂體腺苷酸環(huán)化激活肽27環(huán)化激活肽27（PACAP-27）elisa定量檢測試劑盒
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