詳細介紹
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產品屬性:
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
胰島β細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X0765 |
商品介紹:
名稱 胰島β細胞 2.組織來源:胰腺組織 3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介: 人胰島β細胞分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質、脂肪和糖的作用。內分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成,胰島主要由4種細胞組成:α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細胞分泌胰島素,降低血糖;γ細胞分泌生長抑素,以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌;PP細胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細胞,即胰島B細胞,是胰島細胞的一種,屬內分泌細胞的一種,能分泌胰島素,與胰島α細胞分泌的胰高血糖素一起起到調節血糖的作用。胰島B細胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足(胰島素抵抗),會使血糖升高,從而引發糖尿病。而胰島B細胞癌變會生成胰島素瘤,引起惡性血糖降低癥狀。 5.方法簡介: 實驗室分離的人胰島β細胞采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用胰酶逐級消化胰島制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測: 實驗室分離的人胰島β細胞經Insulin含量檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H020 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PD1 / PDCD1 基因全長ORF克隆
ADORA3 轉錄變體2 基因全長ORF克隆
AGTR1 / AT1 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
FCGR2A / CD32a 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
ADORA1 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
SHH / Sonic Hedgehog 基因全長ORF克隆
ADORA2B / ADORA2 基因全長ORF克隆
IL13 / ALRH 基因全長ORF克隆
IL33 / NF-HEV 基因全長ORF克隆
Integrin beta8 基因全長ORF克隆
胰島β細胞0.312-20 ng/mL 人基質金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人蛋白激Tec(Tyrosine-protein kinase Tec)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人同源異形盒蛋白NANOG(Homeobox protein NANOG)ELISA試劑盒
沙氏葡萄糖瓊脂(含氯) 英文名稱:Sabouraud-glucose Agar with Chloramphenicol 產品規格:250g
乳酸桿菌糖發酵培養基 英文名稱:Lactobacillus Carbohydrate Fermentation Medium 產品規格:250g
12.5-800 U/mL ELISA Kit for Human Glutathione peroxidase 1
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-27 subunit alpha
支原體培養基 英文名稱:Mycoplasma Medium 產品規格:250g
0.78-50 ng/mL 人雄激素受體(Androgen receptor) ELISA試劑盒
15.6-1000 pg/mL 人組織蛋白B(CTS-B)ELISA試劑盒