化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠背根神經(jīng)元細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1187 |
商品介紹：
名稱 小鼠背根神經(jīng)元細胞 2.組織來源：脊髓組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 小鼠背根神經(jīng)元細胞分離自脊椎背根神經(jīng)節(jié)；感覺神經(jīng)母細胞發(fā)出軸突，呈束狀，左右對稱地從神經(jīng)管的背部進入，此時的脊神經(jīng)節(jié)即改稱為背根神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元，即神經(jīng)細胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態(tài)各不相同，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經(jīng)節(jié)是周圍神經(jīng)的主要傳入神經(jīng)元，是感覺信號傳導的中繼站。背根神經(jīng)元細胞的獲取較為困難，需要在盡可能短的時間內(nèi)通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經(jīng)節(jié)組織。神經(jīng)組織體外培養(yǎng)方法是當代神經(jīng)科學一項很有價值的研究手段，背根神經(jīng)節(jié)富含周圍神經(jīng)系統(tǒng)感覺神經(jīng)元，已廣泛用于軸突的導向及再生、中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成、神經(jīng)營養(yǎng)因子作用及受體分布、神經(jīng)細胞衰老機制、基因治療、組織工程等神經(jīng)科學的研究。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠背根神經(jīng)元細胞采用膠原酶&胰酶聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠背根神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M166 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CSF2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 TCN2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 CCL25 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
HSPA5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
HSPA5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
EIF2C4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
NT5E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
MMP-14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
CD309 / VEGFR2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
大鼠 GDF5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
小鼠背根神經(jīng)元細胞異丁 Standard for GC,>99%(GC)聚苯乙烯微球 diameter 0.6 - 1.0μm,2.5% w/vAnti-Phospho-HER2(Tyr1221/1222)/FITC 熒光素標記化HER2受體抗體IgG
5-壬酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm,5% w/v Anti-Phospho-HER2(Tyr1112) /FITC 熒光素標記化HER2受體抗體IgG
2-壬酮 99%聚苯乙烯微球 diameter 2.0 - 2.9μm,5% w/vAnti-Phospho-HER2(Tyr1248) /FITC 熒光素標記化HER2受體抗體IgG
2-辛酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 3.0 - 3.9μm,5% w/v Anti-Phospho-HER2 (Tyr877)/FITC 熒光素標記化HER2受體抗體IgG
仲戊 standard for GC, ≥99.5% (GC)聚苯乙烯微球 diameter 4.0 - 4.9μm,5% w/v Anti-HER3/ErbB3 /FITC 熒光素標記HER3受體抗體IgG
仲戊 98%聚苯乙烯微球 diameter 5.0-5.9μm,5% w/v Anti-HER3/ErbB3/PE 熒光素PE標記HER3受體抗體IgG
2-戊酮 standard for GC, ≥99.5% (GC)聚苯乙烯微球 diameter 6.0 - 6.9μm,5% w/vAnti-HERG/FITC 熒光素標記特異性離子通道蛋白抗體IgG
2-戊酮 99%聚苯乙烯微球 diameter 7.0 - 7.9μm,5% w/vAnti-HEV/FITC 熒光素標記戊型肝炎病抗體IgG
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