化工儀器網
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 視網膜色素上皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1089 |
商品介紹：
名稱 視網膜色素上皮細胞 2.組織來源：視網膜組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 人視網膜色素上皮細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力*。視網膜色素上皮（RPE）位于脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養物質和代謝終產物轉運通道；主要是由單層色素上皮細胞所構成，排列十分規則。視網膜色素上皮參與視黃醇循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。細胞呈多角形，細胞分為三部分，即頂部、體部和基底部。視網膜色素上皮細胞無再生能力，細胞死亡后不被替換，而是鄰近的細胞向側面滑動，以填補死亡細胞遺留下來的空間。視網膜色素上皮位于脈絡膜和光感受器細胞外節之間，是視網膜下腔和脈絡膜血管之間的離子、水、營養物質和代謝終產物轉運通道。視網膜色素上皮參與視黃醇循環，吞噬脫落的光感受器細胞外節以維持光感受器細胞興奮性，并分泌多種生長因子，幫助維持脈絡膜血管內皮細胞和光感受器細胞的結構完整性。 5.方法簡介： 實驗室分離的人視網膜色素上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的人視網膜色素上皮細胞經S-100免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-H129 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態上皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 TNFSF10 / TRAIL 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 TLR3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
小鼠 VEGF-A 轉錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 VEGF-A 轉錄變體3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 CXCL10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 CXCL10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 IL33 / NF-HEV 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 IL33 / NF-HEV 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 CD64 / FCGR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
視網膜色素上皮細胞0.156-10 ng/mL 人衰老關鍵蛋白1(FBLN1)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human MHC class I polypeptide-related sequence A
7.8-500 pg/mL 人內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒
1.56-100 nmol/L 人牙本質基質蛋白1(DMP-1)ELISA試劑盒
硫乙醇酸鹽流體培養基顆粒 英文名稱：Thioglycollate Medium 產品規格：300ml/袋*10
0.156-10 ng/mL 人無翅型MMTV整合位點家族成員2(WNT2)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人腺苷脫氨(Adenosine deaminase)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Lipoxin B4
CCDA添加劑 英文名稱：CCDA Supplement 產品規格：2ml*5支
125-8000 pg/mL 人細胞因子信號轉導抑制因子2(SOCS-2)ELISA試劑盒
化工儀器網