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詳細(xì)介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠表皮角化細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1193 |
商品介紹：
名稱 小鼠表皮角化細(xì)胞 2.組織來源：皮膚組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠表皮角化細(xì)胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結(jié)構(gòu)，由復(fù)層扁平上皮構(gòu)成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質(zhì)層。表皮角化細(xì)胞（KC）是構(gòu)成表皮的主要細(xì)胞成分，在體內(nèi)處于不斷增殖過程中，分裂的角化細(xì)胞主要位于其基底層，少數(shù)位于棘細(xì)胞層。隨著向表層的推移，細(xì)胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠表皮角化細(xì)胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的小鼠表皮角化細(xì)胞經(jīng)PCNA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M168 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CA XII 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CA II 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA II 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TRAILR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
PTP1B / PTPN1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
CA IX 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽
CA IX 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
小鼠 IL10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
ANXA2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標(biāo)簽
TMED10 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標(biāo)簽
小鼠表皮角化細(xì)胞PE-CY5標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody紫杉醇33069-62-4品牌
APC標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody10 methoxycamptothecin19685-10-0規(guī)格
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PE-Cy7標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF8 Antibody鉤吻素甲509-15-9規(guī)格
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Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody異52012-29-0規(guī)格
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