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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 小鼠角膜基質細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1157 |
商品介紹：
名稱 小鼠角膜基質細胞 2.組織來源：眼角膜組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 小鼠角膜基質細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質層、后彈力層、內皮細胞層。角膜基質層是角膜的主要組成部分，占據角膜厚度的90%，由角膜基質細胞、膠原纖維和細胞外基質構成。角膜基質層缺損的修復主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成。角膜基質層具有結構規整，透明度高的特點，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分，維持角膜的透明度，此細胞對于角膜損傷的修復具有重要意義。角膜基質細胞，存在于角膜基質層中，在正常情況下，處于靜止狀態。但當角膜損傷時，不同上皮來源的因子及環境信號，將影響角膜基質細胞的應答反應，決定著角膜能否*被修復。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠角膜基質細胞采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠角膜基質細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M154 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PAH 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
小鼠 IFITM1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
NR2C2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
P53 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
小鼠 Smad3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
ErbB2 / HER2 轉錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 SDC4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
Dkk1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
CXCR7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EpCAM / TROP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠角膜基質細胞15.6-1000 pg/mL 藍舌病病毒(BTV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
1.56-100 ng/mL 人RNA聚合轉錄中介亞基31( Mediator of RNA polymerase II transcription subunit 31)ELISA試劑盒
0.39-25 ng/mL ELISA Kit for Human Glutamate decarboxylase 1
瓊脂培養基B 英文名稱：Agar medium B (Casein soya bean digest agar) 產品規格：250g
0.312-20 ng/mL 人層粘連蛋白β4(LAMβ4)ELISA試劑盒
乳糖蛋白胨培養液顆粒 英文名稱：Lactose Peptone Broth 產品規格：300ml/袋*10
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基（2015藥典） 英文名稱：Violet Red Bile Glucose Agar 產品規格：250g
C81V培養基 英文名稱：C81V Medium 產品規格：250g
78-5000 pg/mL 人VGF神經生長因子誘導蛋白ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130
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