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詳細介紹
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠浦肯野細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1419 |
商品介紹：
名稱 大鼠浦肯野細胞 2.組織來源：小腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠浦肯野細胞分離自小腦皮質(zhì)組織；小腦的表面被覆著一層灰質(zhì)，叫小腦皮質(zhì)，小腦皮質(zhì)分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細胞層和顆粒細胞層。皮質(zhì)里含有星狀細胞、籃狀細胞、浦肯野細胞、高爾基細胞和顆粒細胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。浦肯野細胞（Purkinje cell）是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的能夠傳出沖動的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個浦肯野細胞。浦肯野細胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點是傳導性強，傳導速度快，可達4000mm/s。屬快反應自律型細胞，具有舒張期自動除極化的性能，因而有自律性，但自律性強度明顯低于竇房結P細胞。這類細胞常常平行排列，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。小腦：浦肯野細胞是小腦皮質(zhì)中最大的神經(jīng)元，細胞體呈梨形，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構成廣泛的突觸聯(lián)系，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細胞底部（與主樹突相對方向）發(fā)出，細長，離開胞體不遠便形成有髓神經(jīng)纖維，向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進入白質(zhì)，組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團。一個浦肯野細胞的軸突約形成500個終末膨大，約與小腦深部核團的35個神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細胞常常平行排列，幾個細胞互相以漿膜連接排成一個小束，小束外包繞著基底膜。細胞內(nèi)含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng)，細胞內(nèi)電阻低，只有心室細胞的1/3。浦肯野細胞內(nèi)無橫管系統(tǒng)，但膜電容比收縮細胞大，可能是由于其閏盤結構廣泛而復雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構成浦肯野細胞傳導快的形態(tài)學基礎。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠浦肯野細胞采用胰蛋白酶消化法結合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠浦肯野細胞經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R319 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)神經(jīng)元細胞樣 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
FAP / Seprase 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Cathepsin-B / CTSB 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
GPNMB / HGFIN 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 IL1R1 / CD121a 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
uPAR / CD87 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CLEC3B / Tetranectin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠浦肯野細胞Bacillus subtilis subsp. subtilis尼克酰腺嘌呤二核苷酸氧化5檢測試劑盒
Bacillus subtilis subsp. subtilis低氧誘導因子-1β檢測試劑盒
Bacillus subtilis subsp. subtilis白介素38抗體檢測試劑盒
Bacillus subtilis subsp. subtilisCD27分子檢測試劑盒
Bacillus pumilusDeltaFosB檢測試劑盒
Bacillus pumilus異戊烯基腺嘌呤核苷檢測試劑盒
Bacillus pumilus生長調(diào)節(jié)致癌基因γ檢測試劑盒
Bacillus pumilus球蛋白k可變1D-13檢測試劑盒
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