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你知道蛋白層析純化系統(tǒng)如何使用嗎？
蛋白層析純化系統(tǒng)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異，在混合物通過(guò)含有填充顆粒的層析柱時(shí)，由于各種蛋白的分子大小不同，擴(kuò)散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異，大的蛋白分子會(huì)被先洗脫出來(lái)，分子越小，越晚洗脫，從而達(dá)到分離蛋白的目的。一般來(lái)說(shuō)，層析柱越細(xì)、越長(zhǎng)純化的效果越好。能純化的蛋白分子量范圍很寬，純化過(guò)程中也不需要能引起蛋白變性的有機(jī)溶劑。
蛋白層析純化系統(tǒng)建立蛋白質(zhì)純化工藝時(shí)，重要的是需要考慮純化得到的蛋白質(zhì)應(yīng)能滿足其后續(xù)應(yīng)用要求。蛋白質(zhì)的數(shù)量及純度都必須滿足實(shí)驗(yàn)分析要求。而且，因?yàn)楹罄m(xù)研究需要的是保持良好折疊結(jié)構(gòu)的活性蛋白質(zhì)，因此蛋白質(zhì)行為的相關(guān)信息也需要考慮。
在純化及后續(xù)的保存過(guò)程中，很多處理方法都會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的性質(zhì)產(chǎn)生影響，如蛋白質(zhì)的去折疊、聚集、降解和失活等。
制定詳細(xì)計(jì)劃，在較短時(shí)間內(nèi)完成蛋白質(zhì)純化，并在穩(wěn)定的條件下進(jìn)行保存才算是成功地完成了其整個(gè)純化過(guò)程。
蛋白層析純化系統(tǒng)遵循的基本原則：
1.待純化無(wú)料樣品的來(lái)源，目的蛋白的理化性質(zhì)要充分了解熟悉（基本包括分子量、PI、主要雜蛋白來(lái)源等）；
2.純化工藝設(shè)計(jì)時(shí)要明確純化所要達(dá)到的期望目標(biāo)目標(biāo)；
3.依據(jù)所要達(dá)到的期望目標(biāo)，對(duì)純度，回收率，活性、實(shí)驗(yàn)成本等因素合理取舍，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的純化工藝；
4.熟悉蛋白純化過(guò)程的各種常用添加劑的性能和作用，合理的添加使用，可以是純化工藝事半功倍。