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蛋白純化儀使用常見的一些問題解決辦法

閱讀:2341        發布時間:2020/11/25
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  蛋白純化怎么提純,蛋白是大分子,和各種分子大小不同的白蛋白,有使用一些更簡單的方法,以在蛋白質和小分子材料,并且還分離的蛋白質混合物中分離出來。分離不同分子大小的蛋白質主要是透析,超濾,凝膠過濾,離心分離等的方法。透析和超濾通常用于蛋白質分離方法。待分離的透析混合物放置在由半透膜的透析袋,然后浸入在透析液分離。超濾是通過半透膜中使用的離心力或壓力的水和其他小分子,并截留在所述半透膜的過程中的蛋白質。
  蛋白純化儀純化方式是什么:
  1、沉淀。
  2、電泳:帶電蛋白質是高于或低于它的等電點,在電場中可被移動到負電極或電場的正電極。支撐有薄膜電泳,電泳等。
  3、透析:利用兩個透析袋把大分子進行蛋白質與小分子有機化合物可以分開的方法。
  4、層析:離子交換色譜,利用蛋白質的自由性質,特定的PH下,蛋白質的電荷量和性質不同,可以用離子交換色譜分離。陰離子交換色譜,負功率小的蛋白質首先被洗脫。分子篩,也稱為凝膠過濾。細小的蛋白質進入毛孔,并在里面停留很長時間。大的蛋白質不能進入毛孔并直接流出。
  5、蛋白純化儀純化方式是什么,超速離心:蛋白質純化可用于確定分子量可以用作所述蛋白質。其形成不同密度不同的蛋白質是分離的。
  蛋白純化儀的使用小技巧:
  基線走不平
  基線上飄?下飄?上下波動?
  解決辦法:
  基線走不平通常是因為紫外流通池卡住小氣泡,這時候使用儀器較大流速10%~20%的流速沖洗儀器幾分鐘到十幾分鐘,基線基本就乖乖聽話了哦!
  壓力過大
  有些實驗所用層析柱子耐壓比較小,為了保護柱子就需要我們減小系統壓力。由于進樣閥和紫外流通池都具有較大的壓力,可以選擇泵頭上樣,這時候管路可以不連接進樣閥及其他非必需部件。
  換液進氣泡
  在使用泵頭上樣過程中,更換緩沖液時如何確保管路外接口不進氣泡?
  解決辦法:把上樣泵頭入口放置低于廢液出口水平面,學好物理還是有用滴!
  莫名其妙柱子就干了
  你是否遇到過實驗進程很順利,柱子卻突然干掉,而檢查各管路及接頭卻沒有松動?那么很有可能是儀器使用時間稍長有雜質污染了泵后單向閥,導致A、B兩泵之間液體可以互流。這個問題可以通過抽其中一個泵的抽液閥,觀察另一個泵進樣管路里的液體是否隨之流動來確定。
  自己動手拆卸零件?太復雜!勞煩工程師修理換件?快也要半天或一天能解決好。那么如何不影響實驗進程?答案很簡單,實驗前把A、B兩泵同時充滿水,后面換液時只要保證不用的那個泵也充滿液體就可以了。做了這個小小的改變,柱子再也不莫名其妙的干了。

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