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純化標(biāo)簽蛋白時填料的選擇
基因工程提供了人們改變蛋白質(zhì)性質(zhì)的機會，因而可以借此改善蛋白質(zhì)的純化特性。通過在目的DNA的3’端或5’端插入DNA序列，可以改變蛋白質(zhì)兩端的氨基酸序列，進而作為可純化的融合蛋白。這些融合子可幫助蛋白質(zhì)形成包含體，用于穩(wěn)定蛋白質(zhì)，免受蛋白酶的攻擊，還可以賦予蛋白質(zhì)特定的純化性質(zhì)，使其適用于免疫親和、金屬螯合、離子交換、疏水色譜以及其他分離操作。此外，對于已知特性的蛋白質(zhì)，改變其中特氨基酸可引入具有特定基質(zhì)吸附親和力的片段。
市面上有兩種很常見的標(biāo)簽，分別為組氨酸標(biāo)簽和GST標(biāo)簽，這兩種標(biāo)簽可插入蛋白形成重組蛋白，月旭科技現(xiàn)有針對這兩種標(biāo)簽蛋白純化的填料可供選擇。
His-Tag（組氨酸標(biāo)簽）是重組蛋白表達zui常用的標(biāo)簽，無論表達的蛋白是可溶的或者包涵體都可以用固定金屬離子親和層析純化。6×His-tag是指六個組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。
純化組氨酸標(biāo)簽蛋白zui常用的配體是亞氨基二乙酸（IDA）和次氨基三乙酸（NTA），可使用月旭科技Ni Tanrose 6FF（NTA）或Ni Tanrose 6FF（IDA）來純化。
技術(shù)參數(shù)
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谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）是一種親和標(biāo)簽，用GST標(biāo)記真核蛋白可增強融合蛋白的溶解性。此外，帶有 GST 標(biāo)簽的蛋白可以在細菌中高水平表達，但可能會由于蛋白聚集而形成包涵體。一般將GST標(biāo)簽添加到目標(biāo)蛋白質(zhì)的N或C末端。
GST對谷胱甘肽具有很相對強的親和力，這意味著可以在固定的基質(zhì)（如鍵合谷胱甘肽的填料）上捕獲GST蛋白融合物。這種結(jié)合特性可用于蛋白質(zhì)純化以及通過蛋白質(zhì)的結(jié)合，來捕獲對應(yīng)的蛋白質(zhì)。因此可使用月旭科技GST Tanrose 4FF來純化GST標(biāo)簽蛋白。
技術(shù)參數(shù)
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