首頁 >> 供求商機
Protein A/G瓊脂糖凝膠通常用于從血清、細胞培養上清或腹水中分離抗體，以及從細胞或組織提取物中分離抗原進行免疫沉淀和免疫共沉淀。蛋白A/G瓊脂糖偶聯高質量的重組蛋白A/G，它可以結合抗體的IgG結合域,這些結構域可以與許多不同物種的抗體結合，包括小鼠、人、兔、豬、狗和貓。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
Protein A/G瓊脂糖凝膠 | AP64L233 | 1 mL | 400 |
運輸與保存
常溫運輸。4℃保存，有效期24個月。
技術參數
介質 | 4%高度交聯的瓊脂糖微球 |
大小 | 30-100um |
濃度 | 25% |
結合力 | ≥ 6 mg human IgG/mL of beads |
適用范圍 | IP，CoIP, ChIP |
使用方法
懸浮細胞樣品
1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。
2.用PBS 洗細胞一次，即用 PBS 將細胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。
3.用預冷的IP Lysis/Wash Buffer重懸細胞。每50mg 細胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入PMSF等相應的抑制劑，混勻后置于冰上靜置5-20 min（期間混勻幾次）。
4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min離心收集上清液，置于冰上以備后續實驗（或置于-80 ℃長期保存）。
血清樣品
一般建議建議用IP Lysis/Wash Buffer稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為50~150 µg/mL，置于冰上備用（或置于-20 ℃長期保存）。
免疫復合物的制備
【注】：樣品所需的量和孵育時間均依賴于每個特定的抗體-抗原體系，因而可能需要優化才能得到最大產量。
以下實驗方案針對2-10μg 親和純化的抗體，根據需要可以按比例放大。
1.在離心管中，將每個樣品的細胞裂解液與2-10μg 免疫沉淀抗體結合。每個免疫沉淀反應推薦的總蛋白量為500-1500μg。
2.用IP Lysis/Wash Buffer將抗體以及制備好的樣品稀釋至300-500μL。
3.在室溫下孵育1-2 h，或4 ℃過夜，以形成免疫復合物。
免疫沉淀
【注】：為保證微球均勻分布，使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中微球。
1.將25µLProtein A/G瓊脂糖加入1.5 mL 離心管中。
2.向離心管中加入500 µL 預冷PBS，輕柔混勻。
3.然后4℃、1000g離心5min,去除上清。
4.向離心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻1min。4℃、1000g離心5min,去除上清。
5.將抗原樣品/抗體混合物加入裝有Protein A/G瓊脂糖的離心管中，保持混勻室溫下孵育1-2 h，或4℃過夜。
6.4℃、1000g離心5min，除去未結合的樣品，保存以備分析。
7.向離心管中加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。4℃、1000g離心5min收集瓊脂糖，棄上清。再重復洗兩次。
8.向離心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于100℃水浴或者金屬浴中加熱10 min。離心后，保留含有目的抗原的上清。
注意事項
1.本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會導致微球聚集而降低結合能力。
3.IP實驗中不同類型的抗體與抗原結合的親和性是有區別的，抗體與抗原結合還會受到IP Lysis/Wash Buffer的影響，因此，如使用本實驗步驟不能獲得最佳的實驗結果，可自行優化操作細節或者篩選及配制緩沖液進行實驗，推薦使用李記生物的相關產品，參照相關產品推薦。
4.瓊脂糖使用前應充分振蕩均勻。瓊脂糖應保存在儲存溶液中，防止干燥。
附錄：蛋白A/G與不同種類的Ig，s及其亞類的結合強度
Species | Antibody Subtype | Protein A | Species | Antibody Subtype | Protein A | Species | Antibody Subtype | Protein A |
Human | Total IgG | +++++ | Mouse | Total IgG | +++++ | Cow | Total IgG | +++++ |
IgG1, IgG2 | +++++ | IgM | – | IgG1,IgG2 | +++++ | |||
IgG3 | +++++ | IgG1 | +++ | Goat | Total IgG | +++++ | ||
IgG4 | +++++ | IgG2a ,IgG2b | +++ | IgG1,IgG2 | +++++ | |||
IgM | + | IgG3 | +++ | Sheep | Total IgG | +++++ | ||
IgD | – | Rat | Total IgG | +++ | IgG1, IgG2 | +++++ | ||
IgA | + | IgG1, | +++ | Horse | Total IgG | +++++ | ||
IgA1, IgA2 | + | IgG2a | +++++ | IgG(ab),IgG(c) | + | |||
IgE | +++ | IgG2b | + | IgG(T) | +++++ | |||
Fab | + | IgG2c | +++++ | Monkey | Total IgG | +++++ | ||
ScFv | + | Pig | Total IgG | +++++ | Chicken | Total IgG | – | |
Rabbit | Total IgG | +++++ | Donkey | Total IgG | +++++ | Notes: | + weak binding | +++ medium binding |
Guinea Pig | Total IgG | +++++ | Cat | Total IgG | +++++ | +++++ strong binding | – no binding | |
Hamster | Total IgG | +++ | Dog | Total IgG | +++++ |
相關產品推薦
1XPBS （無菌） （貨號：AC08L011）
Western/IP細胞裂解液（帶抑制劑） （貨號：AP01L076）
蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x） （貨號： AP14L036）
8