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小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒使用方法

閱讀：2075 發布時間：2017-12-4

上海依赫生物科技有限公司專業生產ELISA試劑盒

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒

用途：用于小鼠血清、血漿及相關液體樣本中去甲腎上腺素（NE）的測定。

檢測原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE）的水平。向預先包被了小鼠去甲腎上腺素（NE）單克隆抗體的酶標孔中加入去甲腎上腺素（NE），溫育；溫育后，加入生物素標記的去甲腎上腺素（NE）抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠去甲腎上腺素（NE）的濃度呈正相關。

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒廠家

上海依赫生物科技有限公司專業生產ELISA試劑盒

試劑盒組成

	名稱	96孔配置 12孔×8條	48孔配置 12孔×4條	備注
1	標準品（500pg/ml)	0.5ml	0.5ml	稀釋即用型
2	酶標包被板	1塊	1塊	已包被即用型
3	標準品稀釋液	3ml	3ml	即用型
4	鏈霉親和素-HRP	6ml	3ml	即用型
5	30x倍濃縮洗滌液	20ml	20ml	蒸餾水稀釋
6	生物素標記的抗去甲腎上腺素（NE）抗體	2ml	2ml	即用型
7	顯色劑A液	6ml	3ml	即用型
8	顯色劑B液	6ml	3ml	即用型
9	終止液	6ml	3ml	即用型
10	說明書	1份	1份	即用型
11	封板膜	2張	2張	不可反復使用
12	密封袋	1個	1個	即用型

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒批發廠家

需要而未提供的試劑和器材

酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。
洗板機（可調注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。
超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。
高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).
高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).
37℃恒溫箱。
低溫離心機。
電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9. 漩渦混合儀，低頻振蕩器等

小鼠去甲腎上腺素（NE） ELISA檢測試劑盒供應商

注意事項

從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7. 各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

8. 每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。

9. 配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

10. 實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作，并在使用前充分預熱。

11. 手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

上海依赫生物科技有限公司專業生產ELISA試劑盒

樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據存放，時間做相應溫度調整，但應避免反復凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

標準品的稀釋：（本試劑系統提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執行：

250pg/ml	（5號標準品）	120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
125pg/ml	（4號標準品）	120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
62.5pg/ml	（3號標準品）	120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
31.2pg/ml	（2號標準品）	120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
15.6pg/ml	（1號標準品）	120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加樣：1）空白孔：（空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗去甲腎上腺素（NE） 抗體，鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同 ；2）標準品孔:加入標準品50μl，鏈霉親和素-HRP50μl（標準品中已事先整合好生物素標記抗體，故在操作時不加，只加鏈霉素-HRP）；3）樣本反應孔：加入樣本40μl，然后各加入抗去甲腎上腺素（NE） 抗體10μl、鏈霉親和素-HRP（空白孔除外）50μl。蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。