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轉(zhuǎn)染效率低？這份細(xì)胞轉(zhuǎn)染攻略，快收藏了吧！
閱讀：399發(fā)布時(shí)間：2024-1-29
從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可將轉(zhuǎn)染分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過(guò)某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的基因表達(dá)是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測(cè)基因功能或蛋白質(zhì)表達(dá)，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細(xì)胞的基因組中，這種整合過(guò)程需要更長(zhǎng)時(shí)間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達(dá)是長(zhǎng)期且穩(wěn)定的，因?yàn)橥庠椿驎?huì)被傳遞給子代細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長(zhǎng)期表達(dá)目標(biāo)基因的實(shí)驗(yàn)，例如生產(chǎn)重組蛋白、進(jìn)行基因敲除或敲入等研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染通常可分為三類途徑分別為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。
物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍等
化學(xué)介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等
生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo)，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等
怎么選擇轉(zhuǎn)染試劑：
小編對(duì)這三個(gè)途徑的常用方法進(jìn)行了總結(jié)，記得給小編點(diǎn)個(gè)收藏hahaha~
物理介導(dǎo)——電穿孔法
原理：電流能夠擊穿細(xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)。
優(yōu)點(diǎn)：原理簡(jiǎn)單；不需要載體。
缺點(diǎn)：需要特殊設(shè)備，電流對(duì)細(xì)胞傷害非常大。
化學(xué)介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
原理：陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用，將DNA分子進(jìn)行包裹，形成DNA脂復(fù)合物，能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。
優(yōu)點(diǎn)：操作比較簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)染效率高。
缺點(diǎn)：需要進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染；對(duì)血清敏感；價(jià)格較高。
化學(xué)介導(dǎo)——陽(yáng)離子聚合物
原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似，都是利用陽(yáng)離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物，利用細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
優(yōu)點(diǎn)：在血清內(nèi)穩(wěn)定；對(duì)細(xì)胞毒性相對(duì)較低；轉(zhuǎn)染率高；性價(jià)比高。
缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染。
生物介導(dǎo)——病毒感染
原理：通過(guò)侵染宿主細(xì)胞從而將外源基因?qū)氲郊?xì)胞中。
優(yōu)點(diǎn)：高轉(zhuǎn)染率；適用性廣。
缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；需要構(gòu)建病毒載體，步驟較為復(fù)雜。
然而，一種方法不會(huì)適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求來(lái)選擇。合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。
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