目前，在抗生素新藥申報日益嚴格的大背景下，聚合物雜質的研究常常是藥品審評中心（Center for Drug Evaluation, CDE）發補及退審的理由。抗生素中聚合物雜質是引起臨床不良反應的主要過敏原，嚴格控制其含量具有重要的意義。傳統的聚合物雜質檢測通常采用排阻色譜法，該方法檢測時間長、分離度和專屬性不足，對聚合物雜質進行籠統的總量控制，定量不準確，且無法鑒定聚合物雜質的結構。

為了解決這些難題，島津公司與北京新領先醫藥科技發展有限公司合作搭建了SEC-RPLC-QTOF二維液相色譜-高分辨質譜檢測平臺。基于該平臺二維雜質動態上樣、在線脫鹽等技術，以及島津高分辨質譜儀的高質量準確度和高質量穩定性等性能特點，目前雙方的研發人員共同參與完成了十四種β-內酰胺類抗生素的聚合物雜質的全面解析，并建立質譜數據庫。

二維液相色譜-高分辨質譜檢測平臺

SEC-RPLC-QTOF

參考2020年版《中國藥典》頭孢米諾和頭孢地嗪有關物質Ⅱ檢測方法，一維采用島津Shimpack Bio Diol-60高效凝膠色譜柱進行分離，將聚合物雜質指針性地導入樣品環；然后采用中心切割在線除鹽進行二維反相色譜分離目標雜質，并通過LCMS-9030四極桿飛行時間高分辨質譜采集，獲得準確的一級和二級質譜數據來達到鑒定雜質的目的。

SEC-RPLC-QTOF

二維液相色譜-高分辨質譜檢測平臺流路圖

抗生素雜質數字化標準品數據庫

創新中心開發的《抗生素雜質數字化標準品數據庫》已收錄《歐洲藥典》β-內酰胺類抗生素相關雜質標準品基于島津液相色譜-高分辨質譜儀LCMS-9030采集的ESI正/負雙模式，7個不同碰撞能量下的二級質譜圖，同時數據庫已登錄化合物信息、可能的結構式、分析方法的色譜條件和《中國藥典》流動相條件對應的保留時間等。此外，為方便使用者從高分辨質譜方法向低分辨質譜方法的轉化，本數據庫還登錄了14種抗生素品種相關雜質的MRM方法文件，適用于液相色譜-三重四極桿質譜產品的檢測。

目前數據庫包含頭孢甲肟、拉氧頭孢、氟氧頭孢鈉、頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢他碇、頭孢吡肟、頭孢唑啉鈉、阿莫西林、頭孢呋辛酯、頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉、頭孢克肟、頭孢泊肟酯和頭孢地尼等14種β-內酰胺類抗生素品種，153種雜質和主成分對照品，以及50余種高分子聚合物雜質的共計1483張二級質譜圖。

應用案例：阿莫西林聚合物雜質的鑒定

采用SEC-RPLC-QTOF二維液相色譜-高分辨質譜檢測平臺共檢出阿莫西林熱降解溶液中14種雜質成分，成功分離出阿莫西林二聚體，三聚體，四聚體及其異構體。下圖為阿莫西林二聚體在數據庫中的檢索結果。

阿莫西林二聚體鑒定結果

詳細信息請參考：《阿莫西林膠囊熱降解聚合物雜質的2D-HPLC分析及質譜裂解機理探討》《藥物分析雜志》中圖分類號：R917 文獻標識碼：A  文章編號：0254-1793(2021)07

doi: 10.16155/j.0254-1793.2021.07。

總結

創新中心搭載的專屬性中心切割二維反相色質譜聯用分析平臺SEC-RPLC-QTOF，采用中心切割技術，在線除鹽分離出目標雜質，利用LCMS-QTOF配合自主開發的質譜庫進行鑒定。該分析平臺不僅為企業客戶大大降低了企業研發成本，同時也為企業的工藝改進、劑型研發、品質提升等方面提供技術參考。