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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2020-12-24 閱讀(7213)
MTT增殖曲線，基本上就是基礎(chǔ)的功能實驗了，養(yǎng)過細胞的你應(yīng)該都會做。
但是，要怎么樣才能省時省力呢？你也知道，如果用MTT的話，加入10ul的MTT后要等四個小時，在活細胞的線粒體中形成甲囋，然后在把培養(yǎng)基吸掉，再加上DMSO溶解，進行檢測。
這個方法是常用的MTT方法，但是會有三個問題，*個是有的甲囋不容易溶解。
還有一個問題就是，由于要讓DMSO充分溶解甲囋，所以會要混勻，就會產(chǎn)生泡沫，影響酶標儀讀值：
第三個問題，就是在吸去培養(yǎng)基的時候，容易把甲囋也吸走，導(dǎo)致終讀值不準。
當然也不是沒有辦法的，這篇文獻中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的堿性DMSO能更快更好地溶解甲囋：
當然，這個也是有人親測可用的。不過，我們還是來談?wù)劻硪环N溶劑哈，就是傳說中的三聯(lián)液，這個其實是1983年Mosmann大神*次發(fā)明MTT法時所采用的溶解液：
初的版本是酸化異丙醇，也就是加入了0.04N的鹽酸的異丙醇。但是后來又衍生成為了：SDS10g，異丁醇5ml，0.1ml的10M HCl，用雙蒸水溶解配成100ml溶液，這就是三聯(lián)液。
三聯(lián)液的優(yōu)點在于不用吸去培養(yǎng)基，當然，缺點就是要溶解很久。不過加完三聯(lián)液后可以過夜，第二天再測。
還有一種檢測方法也很常見，就是CCK8，和MTT的區(qū)別就在于……貴。比如MTT要5分錢，CCK8差不多就5毛……還有一點就是，CCK8會形成水溶性的橙色甲囋，MTT形成的是紫色的有機溶劑溶解的甲囋。
所以CCK8加入后，就直接等4小時左右，讓橙色甲囋溶解到培養(yǎng)基就能檢測了。而MTT，就需要用DMSO再溶解出來……
