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原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養(yǎng)的特點是細(xì)胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細(xì)胞活動、結(jié)構(gòu)、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單，細(xì)胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。

（9） 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長滿整個培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進行傳代培養(yǎng)。

小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

新型分泌細(xì)胞表面蛋白/成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白SCUBE3抗體

細(xì)胞蘋果酸酶（Malic enzyme）活性比色法定量檢測試劑盒

持久型ECL免疫印跡化學(xué)發(fā)光溶液

JM109細(xì)菌

石蠟切片組織TRAIL 蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒

通用型艱難梭菌（Clostridium difficile）基因檢測試劑盒

冰凍切片制片處理試劑盒

血液磷酸二酯酶5（PDE5）活性熒光定量檢測試劑盒

真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測定試劑盒（過氧亞硝基陰離子）

冰凍切片中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試劑盒

細(xì)胞羥賴（hydroxylisine）含量比色法定量檢測試劑盒

CDK3蛋白免疫共沉淀分析試劑盒

營養(yǎng)補充劑L-天化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

細(xì)胞脘蛋白（PRION）蛋白表達比色法定量檢測試劑盒

組織肌酸激酶同工酶肌肉型（CK-MM）活性比色法定量檢測試劑盒

全血基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒

著絲粒蛋白O抗體

肝再生磷酸酯酶2抗體

染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8單克隆抗體

KIAA1468蛋白抗體

細(xì)胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir5.1抗體

β1-6 N-乙酰氨基糖轉(zhuǎn)移酶6抗體

酪蛋白激酶SgK223抗體

小鼠骨骼肌成纖維細(xì)胞ATP依賴性解旋酶ATRX抗體

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉(zhuǎn)移至一個小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。