目錄:上海一研生物科技有限公司>>細胞分析>>細胞因子及蛋白 /工具酶>> 末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 40 μg/100 μg |
|---|---|---|---|
| 貨號 | EY-01X8582 | 應用領域 | 化工 |
| 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品屬性：
產品名稱 | 英文名稱 | Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT) | |
規格 | 40 μg/100 μg | 貨號 | EY-01X8582 |
運輸條件 | 藍冰運輸 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
背景：
末端脫氧核苷酸轉移酶，也稱為末端轉移酶，是在未成熟的，B淋巴樣細胞前提，T淋巴細胞前體和急性淋巴細胞白血病/淋巴瘤細胞中表達的一種特殊的DNA聚合酶。 通常，TdT催化將核苷酸添加到DNA分子的3'末端。 與大多數DNA聚合酶不同，它不需要模板。 該酶的優選底物是3'突出端，但它也可以將核苷酸添加到平末端或凹入的3'末端。
標記：
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2 h，棄培養基。
【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟：
1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。
2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。
3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。
4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。
6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。
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