Stbl3 Chemically Competent Cell

產品規格

Stbl3：                                                              100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期)：                                 -80℃（6個月） 

基因型

F- mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Str^R) xyl-5 λ^-leu mtl-1 endA1+

Stbl3 Chemically Competent Cell產品說明

Stbl3菌株來源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒載體系統推薦使用的菌株。基因組含有重組酶recA13突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacI^qZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。Stbl3感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>10⁸cfu/μg DNA。 

操作方法

1. Stbl3感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富，可提高轉化效率)。

4. 37℃，225 rpm復蘇60分鐘或30℃，225 rpm復蘇90分鐘。

(當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘）

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C. 或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。

(當質粒中含有不穩定片段時，30℃培養可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃培養過夜)

注意事項

1. 對不穩定DNA段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在30℃培養，以減少發生錯誤重組的概率。

2. 制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后使用。

3. 對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存，盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。

4. S.O.C.或LB培養基均可使用，S.O.C.可提高轉化效率20%；實驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞，37℃條件下，菌生長速度加快，有利于提高質粒產量，30℃培養可降低錯誤重組概率。

5. 感受態細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的DNA時應輕柔操作。

6. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。