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DH5α Chemically Competent Cell
XL10-Gold Chemically Competent Cell
DB3.1 Electroporation-Competent Cel
DB3.1 Chemically Competent Cell
純度 | 99.99% | 供貨周期 | 現貨 |
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規格 | 100μl/支 | 貨號 | XY9105 |
應用領域 | 醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業 | 主要用途 | 發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacteri |
Ar.Qual Chemically Competent Cell
產品規格
Ar.Qual: 100μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質期): -80℃(12個月)
基因型
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)
Ar.Qual Chemically Competent Cell產品說明
發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大
多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒,具有
廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,番茄,柑橘等),同時具有鏈霉素,氯霉素抗性。本公司生產的Ar.Qual化學
轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒(卡那霉素抗性)檢測,轉化效率>104 cfu/μg DNA。
常規操作方法
1.取-80℃保存的Ar qual發根農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入冰中。
2.每100μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,一次使用前做預實驗確定所加質粒的量)
,用手快速、劇烈打管底混勻或用槍吹吸混勻,依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、
冰浴5分鐘。
3. 冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY液體培養基,于28℃振蕩培養2小時。
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上,
倒置放于28℃培養箱培養2-3 天
● 農桿菌相關抗生素配方:
抗生素 | 配方 | 原液 | 工作液 |
羧芐青霉素 (carb) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
硫酸卡那霉素(kan) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 50 mg/ml | 50 μg/ml |
鏈霉素 (strep) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 50 μg/ml |
利福平 (rif) | DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 10 mg/ml | 20 μg/ml |
慶大霉素 (gent) | 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 20 mg/ml | 40 μg/ml |
氯霉素(cam) | 無水乙醇溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 | 34 mg/ml | 34 ug/ml |
常用農桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)
農桿菌菌株 | 羧芐青霉素(carb) | 鏈霉素(strep) | 利福平(rif) | 氯霉素(cam) | 硫酸卡那霉素(kan) |
Ar.A4 | S | S | S | S | R |
MSU440 | S | R | S | S | S |
Ar.Qual | S | R | S | R | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
ATCC15834 | S | S | S | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
Ar.1193 | R | R | R | S | S |
● TY配方(1L):
Tryptone 5g
Yeast extract 3g
補水到1L體積,*溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌
配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌
每1L 滅菌的TY液體營養液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。
若配制TY固體培養基,則加入15g 瓊脂粉。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉
化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。
2. 混勻質粒時應用手指快速打管底或用槍吹吸混勻,務必使質粒快速、均勻分散開,
與感受態細胞充分接觸。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲
得大的菌落,應減少質粒用量或降低涂板的菌量。
4. Ar.Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性,不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質粒的轉化。
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