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上海信裕生物科技有限公司
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Ar.Qual Chemically Competent Cell

參   考   價: 1350

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質生產商

所  在  地上海

更新時間:2020-09-03 15:06:59瀏覽次數:897次

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純度 99.99% 供貨周期 現貨
規格 100μl/支 貨號 XY9105
應用領域 醫療衛生,環保,化工,生物產業,農業 主要用途 發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacteri
Ar.Qual Chemically Competent Cell是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,番茄,柑橘等),同時具有鏈霉素,氯霉素抗性。

Ar.Qual Chemically Competent Cell

產品規格
Ar.Qual:                                                                      100μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                       10μl
保存條件(保質期):                                            -80℃(12個月)

基因型

 

Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri (agropine type)

 

Ar.Qual Chemically Competent Cell產品說明

發根農桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大

多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發根農桿菌菌株含有農桿堿型Ri質粒,具有

廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,番茄,柑橘等),同時具有鏈霉素,氯霉素抗性。本公司生產的Ar.Qual化學

轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒(卡那霉素抗性)檢測,轉化效率>104 cfu/μg DNA。

 

常規操作方法

1.取-80℃保存的Ar qual發根農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入冰中。

 

2.每100μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,次使用前做預實驗確定所加質粒的量)

,用手快速、劇烈管底混勻或用槍吹吸混勻,依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、

冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY液體培養基,于28℃振蕩培養2小時。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上,

倒置放于28℃培養箱培養2-3 天

 

● 農桿菌相關抗生素配方:

 

 抗生素

 配方

 原液

 工作液

 羧芐青霉素 (carb)

雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

 硫酸卡那霉素(kan)

雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 50 mg/ml

 50 μg/ml

 鏈霉素 (strep)

雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 10 mg/ml

 50 μg/ml

 利福平 (rif)

DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 10 mg/ml

 20 μg/ml

 慶大霉素 (gent)

雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 

 20 mg/ml

 40 μg/ml

 氯霉素(cam

無水乙醇溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌

 34 mg/ml

 34 ug/ml

 

常用農桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

農桿菌菌株

羧芐青霉素(carb)

鏈霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar.Qual

S

R

S

R

S

C58C1

S

R

R

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

K599

S

R

S

S

S

Ar.1193

R

R

R

S

S

 

 

● TY配方(1L):

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補水到1L體積,*溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營養液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養基,則加入15g 瓊脂粉。

 

注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉

化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

2. 混勻質粒時應用手指快速管底或用槍吹吸混勻,務必使質粒快速、均勻分散開,

與感受態細胞充分接觸。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲

得大的菌落,應減少質粒用量或降低涂板的菌量。

4.  Ar.Qual具有鏈霉素、氯霉素抗性,不可用于具有鏈霉素抗性或氯霉素抗性質粒的轉化。

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