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引起 ELISA 測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點,試劑因素、標本因素和操作因素。試劑因素:●1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如:有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%,標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差,使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,選擇剛出廠的試劑盒為宜。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產 ELISA 的指標范圍,用一種指標來冒充其它指標,造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。標本因素和操作因素:● 血清是常用的 ELISA 標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種。 內源性物質:有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。外源性物質:外源性物質常常是由于用于 ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
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磷脂酶A2分泌型ELISA試劑盒,本應用試劑盒已完成多中心臨床驗證,并通過國家食藥監總局的認證。我司通過建立覆蓋歐美的采購中心,與歐美1000多個品牌建立了正式的代理與合作,涵蓋所有的生物試劑門類,特別是二三線高質量品牌產品,具有壓倒性地優勢。產品領域:分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳學、免疫學、生物化學、蛋白質學、細胞治療、臨床應用等領域。主營產品:流式抗體、ELISA試劑盒、標準品和對照品、生化試劑、抗體和抗原、細胞因子、技術服務、實驗耗材和消耗品、儀器設備。
磷脂酶A2分泌型ELISA試劑盒試劑盒(多種屬)行業操作流程如下:(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。 (2)酶標板置4℃,包被過夜。(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。 (5)酶標板置37℃箱的濕盒內,孵育60min。 (6)洗板,同(4)。 (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液 100μl。 (8)酶標板置37℃箱的濕盒內,孵育60min。 (9)洗板,同(4)。 (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。 (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 (12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。
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編輯:小檀20181009
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