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基因組提取試劑盒通用基因組DNA提取試劑盒
貨號:D2100
規格:50T、100T
保存:室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復檢期 12 個月,2℃-8℃保存時間更長。開封后請將 RNase A,蛋白酶 K于-20℃保存。
產品說明:
本試劑盒為通用型,適合于從土壤,糞便,昆蟲,以及其他樣本中提取基因組 DNA。對細菌,真菌,昆蟲等樣本都具有很好的裂解效果,大限度的保留了生物 DNA 的多態性。使用本試劑盒提取的 DNA 產量大、完整性好,可直接用于各種常規操作,包括酶切、PCR 、文庫構建、Southern 雜交等實驗。
產品包裝:
操作步驟:
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
1、樣品的處理:
1)土壤:稱取 0.1-0.3g (根據干濕)土壤,放入研缽中,倒入適量的液氮,立即研磨,重復 3 次,使土壤顆粒研成粉末,加 500ul 溶液 A,振蕩*懸浮。
2)糞便:稱取 0.1-0.3g (根據干濕) 糞便,加 500ul 溶液 A,振蕩*懸浮。
3)昆蟲:稱取 0.1-0.3g 昆蟲,倒入適量的液氮,立即研磨,重復 3 次,使昆蟲研成粉末,加 500ul 溶液A,振蕩*懸浮。
4)未知樣品,如為細未狀,可直接稱取 0.1-0.3g(根據干濕)加 500ul 溶液 A,如為塊狀,可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未,再加 500ul 溶液 A,振蕩*懸浮。2、向懸浮液中加入 20ul 10mg/ml 的 RNase A,55℃放置 10min。3、加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K,充分混勻,55℃水浴消化,30min。消化期間可顛倒離心管混勻數次,12000轉離心 10min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
4、加入 500ul 溶液 B,充分混勻。如出現白色沉淀,于 55℃放置 5min,沉淀即會消失,不影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明樣品消化不*,可能導致提取的 DNA 量少及不純,還有可能導致上柱后堵柱子,請增加消化時間。
5、加入 500ul 無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響 DNA 的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中,放置 2min (分兩次加入,每次 700ul)。
6、12000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm 離心 1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中
9、12000rpm 離心 2min,將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。
10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm 離心 2min。
11、離心所得洗脫液再加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心 2min,即可得到高質量的基因組 DNA.。
注意事項:
1、由于樣品不同,終提取的 DNA 含量和純度也有所不同,一般來說,如果所提取 DNA 用電泳的方法檢測不到,PCR 會有結果,樣品盡可能的新鮮。否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量也下降。
2、若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。
3、如果樣品消化不*,后面的離心步驟中可能會出現堵柱子的情況,可適當延長離心時間。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于 50ul,體積過小會影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調此范圍),pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率;DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解。
5、DNA濃度及純度檢測(濃度較高時):得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。 回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD 260 處有顯著吸收峰, OD 260 值為 1 相當于大約 50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。 OD 260 /OD 280 比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
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基因組提取試劑盒通用基因組DNA提取試劑盒訂購說明:
1、絕大部分產品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發貨。
2、部分非常用產品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化,若有變動以訂貨當日新價格為準。
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運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
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