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核酸提取試劑 內毒素清除劑
貨號:E1040
規格:20ml/ 100ml
保存:4℃半年有效,-20℃長期儲存。
產品簡介:
本公司生產的內毒素清除劑主要用于清除 DNA、蛋白質或其他液體樣品中的內毒素。在特定的 pH 值、鹽濃度和溫度條件下,內毒素清除劑能與 DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內毒素特異性結合,經過室溫高速離心后,DNA 或蛋白質等保留在水相,而內毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除。經過 3 次以上重復抽提后可將活性為 5000~50000 EU/ml 的內毒素水平降低到 5~0.5 EU/ml 以下,即降低 1000~10000 倍。
操作步驟:
提取前請將內毒素清除劑放在冰上冰浴 5min,期間翻轉瓶子數次使試劑均勻預冷。
1、a)已純化的質粒 DNA 內毒素清除: 吸取 500μl DNA 溶液于微型離心管, 加入 1/10 體積 3M NaAc pH5.2或 1/20 體積 5M NaCl 溶液,冰浴 5min。
b)在提取質粒 DNA 過程中清除內毒素:以堿裂解法提取質粒為例,在加入裂解液和中和液并離心去除碎片之后,吸取含質粒 DNA 的上清于新離心管中,冰浴 5min。
2、加入 1/5 體積預冷的內毒素清除劑,振蕩混勻,溶液變渾濁。
3、冰浴 5min,溶液應變清亮。
4、37℃水浴 5min,不時振蕩,溶液又變渾濁。
5、12000rpm 室溫離心 5min,溶液應分為兩相,上層水相含 DNA,下層油狀相含內毒素。
6、將含 DNA 的上層水相轉移到新管,棄油狀相,重復抽提三次,即重復步驟 2-6 三次。
7、加入 2.5 體積無水乙醇,-20℃沉淀 30min ;12000rpm 離心 10min,棄上清;加入 70%乙醇洗滌沉淀12000rpm 離心 5min 棄上清;空氣干燥沉淀,加入 100~200μl 無內毒素的高純水或 TE 溶解沉淀。
8、用內毒素檢測試劑測定樣品中內毒素活性,并與初始樣品比較。
注意事項:
1、DNA 濃度>1mg/ml 時清除內毒素效率降低。由于 DNA 和蛋白質本身的性質,清除程序可導致 10-20%的 DNA 丟失,所幸的是與清除內毒素的艱難相比 DNA 更容易提取制備。
2、所有溶液應用無內毒素的高純水配制,所有器械材料均應不含內毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發性水溶液可高壓 120℃高溫處理。
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核酸提取試劑 內毒素清除劑訂購說明:
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