重慶市華雅干細胞技術有限公司 |
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[供應]BeYaMA 1-BeYaMA 1 人多能干細胞無血清培養液 Juvi Human iPSC/ESC Growth
JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
BeYaMATM 1COMPONENTVOLUMESTORAGE
500mL Complete Medium(貨號:HJ0101M)
BeYaMATM 1 訂購信息
JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
BeYaMATM 1 | COMPONENT | VOLUME | STORAGE |
500mL Complete Medium(貨號:HJ0101M) | BeYaMATM 1 Basal Medium(貨號:HJ0102M) | 400mL | Store at 2~8℃ |
BeYaMATM 1 5X Supplement(貨號:HJ0103M) | 100mL | Store at -20℃ |
BeYaMATM 1
JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
人多能干細胞無血清培養液*實驗操作手冊
- 培養皿包被
- 4℃溶解Matrigel(BD 354277)6小時,輕搖混勻。請注意:原液應是均質粘稠的半流體狀態,要避免溫度過高,否則Matrigel會變成凝膠狀態。
- 冰上預冷1.5ml離心管和移液器槍頭,冰上快速將Matrigel分裝成350-500ul/支,儲存于-80℃,用前置于4℃解凍。
- 將溶解的Matrigel加入25ml預冷的無血清DMEM/F12培養基中,輕輕混勻,避免產生氣泡。
- 將稀釋的Matrigel加入六孔板中,1ml/孔,輕搖培養板,使Matrigel均勻鋪在培養板底部。
- Parafilm封好包被的培養板,至于4℃儲存,用前置于37℃培養箱中孵育至少1小時。
- 培養液準備
- 在4℃解凍BeYaMATM 1 5X Supplement(貨號:HJ0103M)添加劑,加入BeYaMATM 1 Basal Medium(貨號:HJ0102M)基礎培養基中,形成500mL BeYaMATM 1 Complete Medium(貨號:HJ0101M)*培養基。
- BeYaMATM 1*培養基可在4℃穩定儲存2周。可按實際用量將BeYaMATM 1*培養基分裝后置于-80或-20℃保存,避免反復凍融。
- hESCs/hiPSCs復蘇
- 復蘇hESCs/hiPSCs前,復溫Matrigel包被的培養板,吸棄孔內液體,加入2ml BeYaMATM 1*培養液及2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632,用以促進細胞貼壁。
- 從液氮罐中取出hESCs/hiPSCs凍存管,浸入37℃水浴,輕輕搖晃,直到細胞融化至僅剩一小塊冰晶,迅速取出并用75%酒精擦拭凍存管外表面,轉移至無菌超凈臺中。
- 將細胞懸液接種至準備好的培養板中,輕輕晃動使細胞均勻分布在板底。
- 小心將培養板放置于培養箱中,避免振動。
- 30-90min后顯微鏡下觀察細胞基本貼壁,更換新鮮BeYaMATM 1*培養液,之后每24h換液,4-6天后傳代。
- hESCs/hiPSCs傳代
- 提前準備好Matrigel(BD 354277)包被過的六孔板,吸棄孔內包被液,加入2ml BeYaMATM 1*培養液。
- 吸棄待傳代hESCs/hiPSCs孔內的培養液,并用1ml無鈣鎂的PBS洗1遍。
- 加入0.5ml Accutase細胞分離液使之*覆蓋皿底。
- 室溫孵育5-8分鐘或37℃孵育3-5分鐘,顯微鏡下觀察到大部分克隆細胞間出現間隙,細胞表面發亮但尚未相互分離時,可吸去Accutase。
- 可將培養板放置37℃繼續孵育1min,或者直接加入適量新鮮BeYaMATM 1*培養液,輕輕搖晃,干細胞集落基本脫落。亦可用細胞刮刀將剩余克隆輕輕刮下,盡量避免用槍頭反復吹打細胞。
- 將制備好的細胞懸液按1:3 - 1:6的比例接種至準備好的培養板中,注意細胞過密則克隆邊界不圓滑,易分化,細胞過稀則克隆存活率降低。
- 輕輕搖晃培養板讓細胞均勻分散,置于37℃,5% CO2培養箱中培養6小時。
- 每天更換培養液,待細胞密度達到80%以上,或者克隆*密度過大,影響細胞生長時進行傳代。
如果您在使用BeYaMATM 1 JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium 人多能干細胞無血清培養液的過程中,有任何技術問題,我們開通了Juvi科學家技術團隊,歡迎您發郵件到Juvi@hystemcell.com 進行交流溝通,我們的目標是:推動中國iPS干細胞技術走向產業和臨床!
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