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當我們提取核酸時,都發生了什么?
2020年初, “核酸檢測”的概念由于*的原因突然正式“出圈”,成為了一時之間大眾口中的熱詞。此中,自動化核酸提取設備由于操作簡單、通量高、速度快的優點而迎來了罕見的廣泛追捧,那么,當它究竟都實現了哪些工作呢?
有些小伙伴可能反手就是一個流程原理圖:
那更進一步的解釋呢?
重點來了!
裂解:通常裂解液中會含有洗滌劑,根據樣本的不同還會添加蛋白酶,用于裂解和溶解蛋白質;另外還有高濃度的離液鹽,如異硫氰酸胍,它能擾亂氫鍵,破壞核酸與水之間的結合,使核酸能夠與磁珠結合。
通過這里我們能夠理解:1.為什么裂解步驟經常需要加熱;2.為什么裂解液會容易起泡;3.為什么裂解的步驟需要長時間的混合。
洗滌:洗滌液中通常含有較大比例的乙醇,一方面能降低溶液介電常數使核酸沉淀以更好的結合,另一方面能洗去殘留的鹽;有時候這里還會有部分離液鹽,用以去除上一步殘留的蛋白質。
通過這里我們能夠理解:1.添加無水乙醇的作用;2.不同洗滌步驟的目的區別。
洗脫:由于在上一步中經過了較大體積的乙醇,在正式洗脫磁珠之前通常會經過“晾干”,充分利用乙醇的易揮發性,避免乙醇的殘留影響后續的實驗。當乙醇被去除,核酸分子恢復親水性,在弱堿性的洗脫液中,核酸被輕易地溶解,從而從磁珠上被解放出來。
至此,完整的核酸提取流程就結束了,通過流程的清晰化,能夠更好地優化試劑盒-儀器之間的磨合,縮短磨合時間,節約時間、人力與經濟成本。
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