面對中藥農殘檢測的你，是否也有如下疑問：

▎如何獲取空白基質？

▎Q法加入冰醋酸的作用？

▎各種前處理方法、檢測方法、凈化填料如何選擇？操作過程有哪些注意事項？

關注睿科集團-中藥農殘檢測系列快問快答，直擊你最想知道的答案！

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33種禁用農藥有什么變化難題？

首先不是普通的氣相色譜方法，是操作更加復雜，要求更高的質譜檢測，中藥材（從類別分：根莖、葉、花、果實等，從成份分：揮發油、色素，淀粉等）的基質復雜，農藥的品種繁多（33種，55個單體）對于質譜的基質干擾各不相同，難以建立通用方法適應全部品種。

其次是15版藥典正文藥材檢測品種四個（甘草、黃芪、人參、西洋參），且只做有機氯，而33種農殘是寫入到通則里，針對的是所有植物類品種，方法中規定需要每個方法都制備基質對照以繪制標準曲線。這幾乎需要每個品種都收集到對應的空白基質。在多數情況下基質效應不能忽略，并且基于濃度與樣品不同，傾向于多變化，非常影響檢測分析準確性。針對33種禁用農藥，要求不得檢出（低于定量限），因此對設備而言，靈敏度要求越高，對應的基質干擾越大。

最后33種農殘不是簡單定量的分析檢測，而是標準就在定量限，如果藥材農殘分析結果高于檢出限低于定量限，需要企業對其進行取樣、前處理、儀器分析等過程的風險進行評估。

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樹脂類，真菌類要測農殘嗎？

來源植物類的都要檢測，但不必批批檢，要做好風險管控。植物類中藥分為9大類，包括全草類、根及根莖類、葉類、花類、果實及種子類、樹脂類、菌藻地衣類、皮類、莖木類。

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方法學驗證時的技術指標要求？

對于方法學驗證的技術指標，我們給大家提供一個參考建議：

1.標準曲線線性 R>0.990;

2.重復性：RSD<10.0% (n≥6）;

3.加標回收率：一般應在 70%～120%之間。在滿足重復性的情況下，部分農藥回收率可放寬至60%～130%;

4.方法檢出限∶當MRL≥0.1mg/kg，檢出限應≤1/10MRL 當MRL<0.1mg/kg，檢出限應≤1/5MRL。

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是否每種中藥基質都需做基質空白？

藥典規定每個藥材都要做基質空白，如果是定性的話可以不用。空白基質樣品是經檢測不含待測農藥的同品種樣品。優先考慮選擇"儀器*未檢出禁用農藥"的基質，其次考慮"檢出濃度"低于通則定量限的基質。

目前空白基質無法定供應渠道，需用實際樣品篩查，并做好空白基質保留工作！

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如何篩查空白基質？

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直接提取或固相萃取與Q法的差異？

Q法在做標準曲線時，一個樣品只能做一個點，所以配制一條標準曲線需要做六個樣品，而采用直提的方法，做一個樣品就能得到7ml以上的供試品溶液，所以配制一條標準曲線只需做一個樣品。

Q法加了水進行提取，所以水溶性提取物比較多，雖然通過凈化管進行凈化，但是部分基質復雜樣品的整體凈化效果還是不足，導致回收率不好。

Q法相較于其它的方法，其基質效果是較強的，并且在氣質上保留時間漂移也比較厲害。

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可否只用一種前處理方法做擴項？

由于中藥品種太多，難以采用一種前處理方法覆蓋大部分中藥材，所以在進行擴項時，建議需要選擇具有代表性的樣品進行5種前處理過程的驗證，這樣后續才能面對大部分藥材的檢驗。

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各種凈化填料有什么作用？

無水硫酸鎂：去除多余水分：PSA的凈化效果和含水量有關，水量越高，凈化效果越差；排除水分對氣相色譜柱的影響

N-丙基乙二胺（PSA）：去除酸性及極性雜質，如有機酸、脂肪酸，部分色素及糖類

十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）：除去非極性化合物，如揮發油、萜類、木質素、脂類、類胡蘿卜素

 硅膠：除去極性較大的雜質，如糖類、鞣質等。

石墨化碳黑（GCB）：去除大部分色素和甾醇，主要用于葉類、花類(會對平面型分子有吸附)

HLB：去除揮發油、萜類、磷脂等，對色素去除能力差

值得注意的是使用石墨化碳黑（GCB）材料凈化樣品去除色素、揮發油效果明顯，但是對于平面結構極性化合物吸附太強，而丙基乙二胺（PSA）同樣用于除去樣品中的有機酸類。兩種材料即對禁用農藥中的磺隆類組分產生吸附，都會導致回收率較低，甚至造成假陰性結果，在實際應用中根據藥材特性適當減少用量。以液質目標考慮，優先選擇HLB及QuEChERS法。

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方法學驗證，添加回收實驗可行嗎？

目前來說，大部分基質的方法學驗證方法都是做加標回收實驗。主要是因為目前中藥基質樣品中要找到含有33種農殘的樣本很困難，所以只能用加標回收來做方法驗證。由于中藥生長情況，以及藥用部位的差異比較大，所以加標回收實驗和真正藥材生長過程中的農藥殘留的原始狀態還是有差異的，但是目前確實沒有更好的方法。

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Q法加入冰醋酸的作用？

加入1%冰醋酸溶液：

由于植物類藥材為低水分樣品，加入水可削弱農藥與基質之間的相互作用，提高提取率。

加入冰醋酸，可以改善p,p'-DDT等的響應在乙腈中急劇減少的現象。

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提取液為何選擇乙腈？

在提取溶劑的選擇上，一般以乙腈或者酸化乙腈為宜，相較于乙腈，甲醇和乙酸乙酯萃取雜質較多，對酸性和堿性農藥的提取效果也不好，而且吸附劑的凈化效果也不好，而丙酮加鹽后難以鹽析，使得水相和有機相難以分層。乙腈對農藥特別是極性農藥（拒嗪酮等）的提取效率較高，吸附劑凈化效果較好，并且對基質中的脂肪、色素、蠟質等非極性成分提取較少，通過鹽析也更容易除去水分。

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上液質的樣品為何要加0.3ml的水？上氣質的樣品為何要加0.3ml的磷酸三苯酯？

加0.3ml水可改變定容液的極性，防止上液質的樣品目標峰產生前拖尾。上氣質的樣品由于分析方法比較長，跑幾次樣品后可能導致目標峰的響應發生變化，所以需要加磷酸三苯酯進行響應校正。

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液質法中需取1ml提取液并加0.3ml水，有些樣品會渾濁或分層，怎么處理？

部分樣品加水后因為體系極性的變化，會產生渾濁或者沉淀，建議加水后再過0.22濾膜再上機分析。

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在做固相萃取第三法時 是否需要適當增加甲苯-乙腈洗脫要求20ml，把萃取柱里的樣品充分洗脫出來？

一般不需要增加體積，因為隨著洗脫體積增多，色素也會被一同洗脫出來，而大部分目標物在15ml左右就基本洗脫出來了。

另外，磺酰脲類除草劑（甲磺隆、等）的回收率偏低是由于NH2的酸堿吸附作用，增加洗脫體積無法改善。

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采用固相萃取1法和固相萃取3法時，磺酰脲類農藥回收率很低，如何解決?

由于磺酰脲類除草劑為酸性農藥，固相萃取一法中的PSA和三法中的NH2柱均會對其產生嚴重吸附，導致其回收率大大降低。可在分取提取液后，加入200ul的冰醋酸，再進行凈化，冰醋酸的加入抑制了磺酰脲類除草劑的離子化，防止其被PSA和NH2柱吸附。