1882年3月24日是著名德國科學(xué)家羅伯特·科赫在柏林宣讀發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌的日子。在1982年紀(jì)念科赫發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌100周年時(shí)，世界衛(wèi)生組織(WHO)和防癆和肺病聯(lián)合會(IUATLD)共同倡議將3月24日作為“世界防治結(jié)核病日”，以提醒公眾加深對結(jié)核病的認(rèn)識。2021年3月24日是第26個(gè)世界防治結(jié)核病日，今年我國的宣傳主題是：“終結(jié)結(jié)核流行，自由健康呼吸”

結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是常見并可致命的一種傳染病，由結(jié)核分枝桿菌感染引起，主要通過空氣傳播。結(jié)核病困擾人類已經(jīng)有成千上萬年的歷史。科學(xué)家們在9000年前的以色列人遺骸和2000年前的埃及木乃伊上都發(fā)現(xiàn)了肺結(jié)核感染的痕跡。如今，這種病每年仍導(dǎo)致大概150萬人死亡，多于其他任何一種傳染病，是目前面臨的重大公共衛(wèi)生問題之一。

2020年10月14日，世界衛(wèi)生組織（WHO）正式發(fā)布了結(jié)核病年度報(bào)告。報(bào)告估計(jì)過去一年新發(fā)結(jié)核病患者仍有1000萬，其中32%為女性，12%為15歲以下兒童，因結(jié)核死亡患者約141萬。大多數(shù)結(jié)核病病例集中在東南亞（44%）、非洲（25%）和西太平洋（18%），而東地中海（8.2%）、美洲（2.9%）和歐洲（2.5%）占比較小；三分之二的結(jié)核患者來自8個(gè)國家：印度（26%）、印度尼西亞（8.5%）、中國（8.4%）、菲律賓（6.0%）、巴基斯坦（5.7%）、尼日利亞（4.4%）、孟加拉國（3.6%）和南非（3.6%）。中國新發(fā)患者數(shù)約83.3萬，僅次于印度和印度尼西亞。防治肺結(jié)核的工作依舊嚴(yán)峻。

早期快速確診及治療是控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵，目前肺結(jié)核的診斷主要依靠患者癥狀、胸部影像學(xué)檢查及痰涂片抗酸染色和痰MTB培養(yǎng)。然而，肺結(jié)核患者癥狀及影像學(xué)檢查往往缺乏特異性，痰涂片抗酸染色法檢查敏感性和特異性都很低，很多時(shí)候會導(dǎo)致漏診；痰MTB培養(yǎng)耗時(shí)長，以上檢測手段難以滿足早期快速診斷肺結(jié)核的要求。隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，越來越多的分子診斷方法被應(yīng)用于結(jié)核病臨床診斷。2017 年我國頒布的《“十三五”結(jié)核病防治規(guī)劃》中明確提出分子生物學(xué)檢驗(yàn)陽性可以輔助確診肺結(jié)核。

分子生物學(xué)診斷

結(jié)核病分子生物學(xué)診斷方法主要分為：

①實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測

②恒溫?cái)U(kuò)增檢測

③基因探針（基因芯片）檢測

實(shí)時(shí)熒光定量PCR

通過監(jiān)測熒光信號實(shí)時(shí)檢測結(jié)核菌的特異基因及耐藥相關(guān)基因 單核苷酸多態(tài)性（SNP） 位點(diǎn)，可以在 2 小時(shí)內(nèi)檢測樣本中是否存在結(jié)核分枝桿菌以及是否耐藥，是目前結(jié)核病分子診斷技術(shù)之一，并且該方法操作簡便、檢測準(zhǔn)確性高（敏感度 88％，特異度 99％）、污染幾率小，不足之處是價(jià)格昂貴，并且目前僅能針對利福平耐藥相關(guān) rpoB 做出檢測，能夠檢測的耐藥相關(guān)基因及位點(diǎn)較少。2010年12月WHO批準(zhǔn)了利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)( Xpert MTB /RIF)的應(yīng)用，該技術(shù)被WHO譽(yù)為結(jié)核病診斷中革命性的突破。

恒溫?cái)U(kuò)增

利用鏈置換型 DNA 聚合酶（Bst DNA polymerase）在恒溫條件下對目標(biāo)基因進(jìn)行快速擴(kuò)增反應(yīng)。該方法可用于涂陰結(jié)核病的診斷，檢測靈敏度在 50％～80％之間，并且恒溫診斷方法對儀器的依賴程度小，試劑成本低，非常適用于基層結(jié)核病的檢測，代表方法：loop-mediated isothermal amplification (TB-LAMP; Eiken Chemical, Tokyo, Japan)。但是該方法容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室檢測時(shí)需要注意分子氣溶膠的產(chǎn)生。

基因探針（基因芯片）檢測

分為擴(kuò)增和檢測兩步，首先對特異的片段進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，然后檢測擴(kuò)增后片段是否與結(jié)核分枝桿菌（MTB）檢測探針或者耐藥檢測探針結(jié)合。其特點(diǎn)是可以區(qū)分結(jié)核病與非結(jié)核病，檢測通量高，并且可以在 5～8 小時(shí)內(nèi)檢測是否為耐多藥結(jié)核病（MDR-TB），代表方法： line-probe assays (LPAs; GenoType® MTBDRplus and GenoType® MTBDRsl, HAIN Lifescience, Nehren, Germany; NTM+MDRTB Detection Kit, NIPRO Corporation, Osaka, Japan)，該方法特異度及靈敏度較高（80％～90％）。其缺點(diǎn)是需要開蓋操作，容易產(chǎn)生污染，并且操作繁瑣，價(jià)格昂貴。

未來展望

過去幾十年，為預(yù)防和治療結(jié)核病及耐藥性結(jié)核病，進(jìn)行了大量努力。結(jié)核病的基礎(chǔ)研究、診斷方法和治療手段都取得了巨大進(jìn)步。通過此次我們也認(rèn)識到分子診斷技術(shù)推廣的必要性，隨著人工智能和實(shí)驗(yàn)室自動化技術(shù)的快速發(fā)展，全面實(shí)現(xiàn)肺結(jié)核自動化分子診斷將是未來的一大趨勢。

參考文獻(xiàn)：

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