目錄:北京博蕾德科技發展有限公司>>Diaclone>>ELISA Kit>> 人白介素23 ELISA 試劑盒
供貨周期 | 兩周 | 規格 | 48T |
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貨號 | 850.960.048 | 應用領域 | 生物產業 |
主要用途 | 用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的白介素23。此試劑盒只用于科 |
Human IL-23 ELISA Kit
用途:人IL-23 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養液中的白介素23。此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。
檢測原理:
IL-23試劑盒應用的是夾心法固相酶聯免疫吸附分析法(ELISA)。IL-23特異單克隆抗體被包被于微孔板上,已知IL-23濃度的標準品和未知濃度的樣品可在此反應孔中進行檢測。先將IL-23抗原和生物素標記IL-23特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶,孵育后洗去未結合的酶。其后加入底物,產生顏色反應,顏色的深淺與樣品中IL-23的濃度成一定的比例關系。
試劑盒組成及配制:
試劑(2-8℃保存) | 1x48孔的配置 產品編號:#850.960.048 |
配制 |
96T微孔板 | 1/2 | 即用型(已包被) |
塑料板蓋 | 2 | |
標準品:100pg/ml | 1瓶 | 按瓶上的說明稀釋(見試劑制備,) |
標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(25ml) | 即用型 |
生物素標記IL-23抗體 | 1瓶(0.4ml) | 用生物素標記抗體稀釋液稀釋(見試劑制備) |
生物素標記抗體稀釋液 | 1瓶(7ml) | 即用型 |
親和素-HRP | 2瓶(5ul) | 0.5ml HRP稀釋液預稀釋(見試劑制備,) |
HRP稀釋液 | 1瓶(23ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(10ml) | 200x,蒸餾水稀釋(見試劑制備) |
TMB | 1瓶(11ml) | 即用型 |
H2SO4終止液 | 1瓶(11ml) | 即用型 |
自備材料:
蒸餾水;加樣器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器
保存條件:
試劑盒保存于2-8度,
洗滌緩沖液:制備好后,2-8度可保存1周以上
標準品:制備好后即用,不要保存。
生物素標記二抗:制備好后即用,不要保存。
親和素-HRP: 制備好后即用,不要保存。
樣品收集,處理和保存:
1. 細胞培養上清:1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
2. 血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
3. EDTA,檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。
4. 如果樣品不直接使用,將其分為小部分(250-500ul)-70℃下保存,避免反復凍融。
如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒,檢測前先離心或過濾。
注意:不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍
實驗方案:
用前所有試劑置于常溫
標準品濃度 pg/ml |
樣品 | |||||||||||
A | 5000 | 5000 | ||||||||||
B | 2500 | 2500 | ||||||||||
C | 1250 | 1250 | ||||||||||
D | 625 | 625 | ||||||||||
E | 312.5 | 312.5 | ||||||||||
F | 156.2 | 156.2 | ||||||||||
G | 空白 | 空白 | ||||||||||
H |
試劑準備:
1. 洗滌緩沖液(200x)的稀釋:蒸餾水200倍稀釋成1X的工作液。
2. 標準品稀釋液的制備:用10X的標準品稀釋液儲液加入225ml蒸餾水。稀釋后的溶液可在2-8度保存一周。
3. 標準品的制備:按標準品瓶上的說明,加入標準品稀釋液,稀釋后濃度為5000pg/ml。溫柔上下顛倒混勻。直接在檢測板上對校準品做系列稀釋,濃度范圍:5000-156.25pg/ml。每次重新做實驗,都需要重新做標準曲線。吸取200ul重懸后的標準品到A1, A2孔(5000pg/ml),取100ul標準品稀釋液到B1, B2, C1, C2, D1,D2, E1,E2, F1, F2孔。從A1, A2孔吸取100ul到B1, B2孔,用加樣器反復吸排使其混合。小心不要擦到孔的內表面。同樣從B1, B2孔吸取100ul到C1,C2;再從C1,C2到D1,D2等,從最后的兩個孔(F1, F2)中吸去100ul不要。這樣從A1,A2到F1,F2,IL-23標準品稀釋液的濃度為5000pg/ml到156.25pg/ml。也可在試管中進行此稀釋,將稀釋后的標準品直接加入反應孔中。
4. 生物素標記IL-23抗體的制備:
生物素標記抗IL-23的稀釋:每次實驗前準備。根據實驗的孔數,以生物素標記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。
反應孔的數量 | 生物素標記抗體(ul) | 生物素標記抗體稀釋液(ul) |
16 | 40 | 1060 |
24 | 60 | 1590 |
32 | 80 | 2120 |
48 | 120 | 3180 |
96 | 240 | 6360 |
5. 親和素-HRP的稀釋:5ul 親和素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液, 每次實驗前準備,不要保存此稀釋后液體。根據反應孔的數量進一步稀釋,見下表。
反應孔的數量 | 親和素-HRP(ul) | 親和素-HRP稀釋液(ml) |
16 | 30 | 2 |
24 | 45 | 3 |
32 | 60 | 4 |
48 | 75 | 5 |
96 | 150 | 10 |
檢測程序
使用前,將所有試劑充分混合,不要使液體產生泡沫。根據樣品數量加上空白,標準品決定所需的板條,每個樣品,標準品,空白和質控都應做雙份。
詳細步驟 | |
1 | 制備標準曲線 |
2 | 按實驗方案在對應孔加入100ul標準品和樣本,標準品,樣本及空白孔均做復孔。 |
3 | 用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育2小時加入50ul生物標記的IL-23抗體到各孔 |
4 | 用封板膜,封板,室溫(18-25.℃)孵育2小時 |
5 | 去掉封板膜,按以下程序洗板: a. 吸出孔內液體。 b. 每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液 c. 吸出孔內液體 重復步驟b和c兩次 |
6 | 加入100ul親和素-HRP溶液到各孔 |
7 | 用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育30min |
8 | 重復步驟5 |
9 | 加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔 |
10 | 室溫避光孵育1--20min,用鋁箔包住反應板, 避免光照。 |
11 | 加入100ul H2SO4到各孔,終止反應。 |
在分光光度計中讀取結果。450nm作為初始波長,630nm作為參考波長。 |
結果分析
以吸光度為Y軸,相應的IL-23標準品濃度為X軸做標準曲線。樣品的IL-23含量可根據其O.D.值由標準曲線推斷出來。
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