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產(chǎn)品名稱：Human sCD141 ELISA Kit 

中文名稱：人cd141 ELISA 檢測試劑盒

生產(chǎn)廠家：法國Diaclone

貨號：950.720.096

Human sCD141 ELISA Kit

            (中文說明書供參考，請以到貨的英文說明書為準(zhǔn))

用途：人sCD141 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清，血漿，緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液中的sCD141,試劑盒可用于檢測天然和重組的人sCD141,此試劑盒只用于科研，不能用于診斷。

檢測原理：

sCD141試劑盒應(yīng)用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）。sCD141特異單克隆抗體被包被于微孔板上，已知sCD141濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的樣品可在此反應(yīng)孔中進(jìn)行檢測。先將sCD141抗原和生物素標(biāo)記sCD141特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶，孵育后洗去未結(jié)合的酶。其后加入底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，顏色的深淺與樣品中sCD141的濃度成一定的比例關(guān)系。

試劑盒組成及配制：

自備材料：

蒸餾水；加樣器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器

保存條件：

試劑盒保存于2-8度，

樣品收集，處理和保存：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
2. 血清——操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
3. EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。
4. 如果樣品不直接使用，將其分為小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反復(fù)凍融。

如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒，檢測前先離心或過濾。

注意：不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

實(shí)驗(yàn)方案：

用前所有試劑置于常溫

試劑準(zhǔn)備：

1. 洗滌緩沖液（200x）的稀釋：蒸餾水200倍稀釋成1X的工作液。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的制備：用前加入225ml純水，2-8度可保存一周以上。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：按標(biāo)準(zhǔn)品瓶上的說明，加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，稀釋后濃度為20ng/ml。溫柔上下顛倒混勻。直接在檢測板上對校準(zhǔn)品做系列稀釋，濃度范圍：20-0.625ng/ml。每次重新做實(shí)驗(yàn)，都需要重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線。吸取200ul重懸后的標(biāo)準(zhǔn)品到A1, A2孔（1000pg/ml），取100ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液到B1, B2, C1, C2, D1,D2, E1,E2, F1, F2孔。從A1, A2孔吸取100ul到B1, B2孔，用加樣器反復(fù)吸排使其混合。小心不要擦到孔的內(nèi)表面。同樣從B1, B2孔吸取100ul到C1,C2；再從C1,C2到D1,D2等，從zui后的兩個孔（F1, F2）中吸去100ul不要。這樣從A1,A2到F1,F2，cd141標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的濃度為20ng/ml到0.625ng/ml。也可在試管中進(jìn)行此稀釋，將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品直接加入反應(yīng)孔中。
4. 樣品制備：在檢測前，人血清或血漿樣本需要用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1:2稀釋。
5. 生物素標(biāo)記cd141抗體的制備：

   生物素標(biāo)記抗cd141的稀釋：每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的孔數(shù)，以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。稀釋量見下表。

1. 親和素-HRP的稀釋：5ul 親和素-HRP加入0.5ml HRP稀釋液, 每次實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備，不要保存此稀釋后液體。根據(jù)反應(yīng)孔的數(shù)量進(jìn)一步稀釋，見下表。

檢測程序

使用前，將所有試劑充分混合，不要使液體產(chǎn)生泡沫。根據(jù)樣品數(shù)量加上空白，標(biāo)準(zhǔn)品決定所需的板條，每個樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白和質(zhì)控都應(yīng)做雙份。

注：制備的生物素標(biāo)記抗cd141及親和素-HRP應(yīng)立即使用。

結(jié)果分析

以吸光度為Y軸，相應(yīng)的cd141標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的cd141含量可根據(jù)其O.D.值由標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷出來。

局限

不要在超出標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測范圍，推測樣本的檢測值，超出檢測范圍的樣本值不呈線性。高濃度的樣品請用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或自備的樣品稀釋液稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測范圍，然后樣品實(shí)際測值再乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

不同藥物會影響檢測結(jié)果。細(xì)菌或真菌及實(shí)驗(yàn)室交叉污染，都可導(dǎo)致不規(guī)律的檢測數(shù)據(jù)。

不正確或不充分的洗滌都可以導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果。

靈敏度：

zui小的人cd141檢測濃度小于0.31ng/ml。

精密度：

批內(nèi)：

批間：

檢測過程：（總時長1h45min）

加100ul樣品或稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ占?0ul生物素標(biāo)記的cd141抗體

↓

室溫孵育1h

↓

洗滌三次

↓

加入100ul親和素-HRP

↓

室溫孵育30min

↓

洗滌三次

↓

加入100ul TMB，避光顯色12-15min

↓

        加入100ul H₂SO4

↓

 450nm讀取吸光度