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人補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒操作流程: 1. 根據需要,將若干孔德條帶放置在支架上;
2. 將標本、陰性質控、陽性質控以及標準品作 1:200 稀釋(將5μl樣品加稀 釋液稀釋到 1ml,混勻) ;
3. 取 100μl 已稀釋的血清樣品、標準品和陰性質控、陽性質控加入相應得孔板 內(質控和標準品至少需做兩孔) ,A1 孔不加液體作為空白底色;
4. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘;
5. 到時間后將孔被液體甩去,并用 1X 洗滌液反復清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗 一次;
6. 在每孔內加 100μl 酶結合物(需按比例稀釋,除 A1 孔外) ,輕微混勻;
7. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘;
8. 甩去孔內酶結合物,用 1X 洗滌液反復清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗一次; (包括 A1 孔也加) ,輕微
9. 在每孔內加 100μlTMB(使用前混合A液和B液) 混勻;
10. 37℃放置 15 分鐘; ,輕微混勻;
11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液(包括 A1 孔)
12. 在 15 分鐘內,用酶標儀在 450nm 處讀取吸光度值(OD 值) (將酶標儀 A1 孔設定為空白孔) 。
二、人補體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒結果換算: 以標準樣品的 OD 值為軸,標準樣品的數值為 X 軸,在方格紙或計算機上作 出標準曲線,然后根據標本的 OD 值讀數在標準曲線上讀出相應的 IgG 抗體 濃度。
三、 ELISA試劑盒結果判定: 陰性:抗體濃度≤20u/ml 為正常 陽性:抗體濃度>20u/ml 為陽性
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