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NHS活化瓊脂糖凝膠FF

英文名稱：NHS activated-Berpharose FF

貨號：B2828

規格：10ml

1.      產品介紹

NHS-瓊脂糖凝膠FF是一種將瓊脂糖凝膠微球用NHS活化形成的生物親和層析分離

介質。該產品保留了瓊脂糖極-好的親水性及大網架結構，同生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高、非特異性吸附少和流速快等特點。本活化的瓊脂糖凝膠能溫和地同氨基基團反應，特別適合偶聯抗體、鏈霉親和素、酶和核酸等功能性生物大分子。

2.規格

1ml、10ml、100ml、500ml 使用方法

應用舉例：

NHS-瓊脂糖凝膠FF偶聯抗體

①配制抗體：取100 mg IgG用10 ml偶聯緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，pH8.3）溶解。

②偶聯反應：取10 ml NHS-瓊脂糖凝膠FF，用50 ml的1 mM HCl分三次清洗去除保存液，之后立即加入到抗體偶聯溶液中，4℃振蕩偶聯6 h或者偶聯過夜。

③封閉：上述溶液過濾，用50 ml偶聯緩沖液清洗偶聯后的凝膠，用10 ml封閉緩沖液（0.2 M NaHCO3，0.5 M NaCl，0.5 M乙醇胺，pH8.3）于室溫振蕩4 h（或者過夜）以封閉未偶聯的基團，之后用20 ml蒸餾水清洗干凈即可。

④檢測：用SDS-PAGE檢測偶聯前后的反應液并計算偶聯效率，偶聯好的填料根基特性測定功能和載量。

5.注意事項：

1)偶聯緩沖液可以是碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用氨基緩沖體系（如Tris-HCl緩沖液）。

2)穩定的配基可以直接溶于0.2 M NaHCO3，可適當提高偶聯溫度（如室溫）將偶聯時間縮短至1~2 h。

3)如對配基的穩定性不夠了解，可以選擇不同pH值緩沖液和不同溫度，用0.5~1 ml配基相應濃度的溶液，在無填料的條件下模擬偶聯反應，觀察溶液是否會產生沉淀。有沉淀產生說明偶聯效果不佳，可適當降低緩沖液pH值或溫度。同時可以添加約5%的甘油或PEG保護蛋白，避免產生沉淀。

4)根據偶聯蛋白的穩定性選擇合適的偶聯pH值和溫度。偶聯較適pH值為pH7.5~9.0，室溫或4℃均可。提高偶聯溫度能夠提高配基的偶聯效率。

5)偶聯蛋白溶液的濃度以5~15 mg/ml為佳。偶聯凝膠體積和配基溶液的體積比以1:0.5~1:2.0為佳。

6)如果偶聯的配基不穩定，可于4℃振蕩偶聯1~12 h以維持配基的活性。偶聯配基后應盡快清洗填料，避免配基在高pH條件下失活。

7)封閉緩沖液一般使用帶氨基的小分子試劑，如乙醇胺、Tris等。于pH8~9、室溫條件下封閉數小時可完-全封閉。推薦封閉緩沖液：0.5 M乙醇胺，0.5 M NaCl，pH8.3或0.1 M Tris-HCl，pH8.5。

8)偶聯中盡量使用溫和的混勻方式，如振蕩、翻轉和旋轉等，如使用磁力攪拌器或者機械攪拌，需要降低攪拌速度，使填料能夠混勻完-全懸浮即可，避免劇烈攪拌導致凝膠微球破碎。

9)NHS-瓊脂糖凝膠FF需現取現用，避免取出后放置時間過長導致活性降低。

10)僅供科研實驗使用

NHS活化瓊脂糖凝膠FF