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原位雜交實驗步驟:前期胚胎的制備。
原位雜交*天進行重新水化和固定、預(yù)雜交、雜交。
原位雜交第二天進行 1 將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。3置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。4置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。5用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。 7 按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連迪高辛抗體,4C 冰箱過夜。
原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。2) 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。3)將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM左旋米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5)將顯色*的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。6)4C冰箱保存。
原位雜交服務(wù)內(nèi)容:
③ 癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測;
④ 基因在染色體上的定位;
⑤ 檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
⑥ 分裂間期細胞遺傳學的研究,如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學劑量測定等。
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