土壤總磷/有機(jī)磷/無(wú)機(jī)磷含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
可見(jiàn)分光光度法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
規(guī)格: 50T/24S
試劑組成和配制：
試劑一：液體 50mL×1
瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。
試劑二：液體 11mL×1
瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 mL 蒸餾水，充分溶解后加入 10 mL
試劑二，混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，40 μg/mL 無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
土壤總磷包括有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，其中無(wú)機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過(guò)礦化分解而
轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷。同時(shí)測(cè)定土壤總磷、有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營(yíng)養(yǎng)狀況。
利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過(guò)浸提法測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼
燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷，測(cè)得土壤總磷含量；總磷含量減去無(wú)機(jī)磷含量，即可計(jì)算出有機(jī)
磷含量。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐，
1mL 玻璃比色皿、蒸餾水、100 目篩子（可更小）。
操作步驟：
一、土壤不同形態(tài)磷提取：
1.
無(wú)機(jī)磷：稱取通過(guò) 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.1g，轉(zhuǎn)移到
10 mL 離心管，加入 10mL 試劑一，
震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃離心
10min，取上清液一，用于無(wú)機(jī)磷含量
測(cè)定。
2.
總磷提取：取通過(guò) 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 mL
離心管，加入 10mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃，離心 10min，
取上清液二，用于總磷含量測(cè)定。
二、測(cè)定步驟：
1.
分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2.
打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。
3.
空白管：取 EP 管，依次加入 500µL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，
室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為 A 空白管。
4.
標(biāo)準(zhǔn)管：取 EP 管，依次加入 50µL 標(biāo)準(zhǔn)液，450µL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃第 2頁(yè)，共 2 頁(yè)
水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為
A 標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測(cè)定管：取
EP 管，依次加入 50µL 上清液一或者上清液二，450µL
蒸餾水，500μL 試劑三，
混勻后置于
40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm
測(cè)定吸光度，記為 A 測(cè)
定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
三、土壤磷含量計(jì)算：
1.
土壤無(wú)機(jī)磷含量（μg /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A
標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V
總÷W =400×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：40μg/ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液一總體積，10 mL。
2.土壤總磷含量（μg /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷
W=400×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A
空白管)÷W
C
標(biāo)準(zhǔn)液：40μg/ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V
總：上清液二總體積，10 mL。
3.
土壤有機(jī)磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無(wú)機(jī)磷
注意事項(xiàng)：
試劑三配制過(guò)程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。
